aatbio品牌代理
aatbio是一家专注从事生物、化学试剂及其试剂盒的高新技术企业；主要以荧光探针，分子探针，核酸/蛋白质标记、细胞检测等技术和产品为研发核心，产品广泛应用于基因合成、细胞检测、活体示踪，抗体标记、新药筛选等领域。
美国AAT Bioquest公司是生物光谱领域全qiu先驱，产品畅销全qiu。长年以来百萤生物与AAT Bioquest互补优势，为国内外广大用户提供光谱检测，底物显色，荧光发光技术等全系列解决方案。近年来，百萤生物已与全球多家zhi名药企、CRO公司、众多高校及科研单位建立了长期稳定的合作关系；我们的服务宗旨：不断创新，为广大科研用户提供优质的服务；主要分为以下几个产品线：
开发和生产荧光标记探针和发光探针。这些荧光标记探针和发光探针是用于标记生物大分子例如，蛋白质，核酸，碳水化合物的主要工具；
检测蛋白质，核酸和活细胞荧光和荧光探针；
新型各种酶活性荧光探针和发光探针(特别是用与研究蛋白酶，蛋白激酶和氧化还原酶荧光标记探针和发光探针)；
开发用于分子信号转导研究试剂和试剂盒；
生物钙膜电位探针和神经生物学荧光标记探针和发光探针；
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| 货号 | CGR100 | 存储条件 | |
| 规格 | Each | 价格 | 33108 |
| Ex (nm) | Em (nm) | ||
| 分子量 | 溶剂 | ||
| 产品详细介绍 | |||
简要概述
CytoCite GR100荧光分析仪是美国AAT Bioquest研发的最新款云集成的掌上荧光分析仪，专为读取红色荧光（Ex / Em = 530 nm / 620 nm）而设计，其灵敏度极限可检测低至1 nM的试卤灵。它体积极小，是市场上最小的荧光分析仪，可轻松集成到任何实验室设备，医疗点使用和现场测试中。此外，作为唯一可用的云型荧光分析仪，CytoCite 荧光分析仪与其他类似产品相比具有几个关键优势，例如Qubit （ThermoFisher的商标）。这些包括 a.无限存储样本结果;b.自动日常数据备份，以防止意外数据丢失; c.跨不同平台同步样本结果，可访问任何经过验证的设备（如智能手机）;d.与AAT Bioquest全面的Quest Graph 分析工具兼容，可实现快速简便的回归建模，IC50计算等。对于测定，CytoCite 荧光分析仪可以使用低至1 uL的样品，并且对于DNA（abs = 260 nm）和蛋白质（abs = 280 nm）比Nanodrop（ThermoFisher的商标）灵敏度高几个数量级。它还与全面的生物测定和荧光测定试剂库兼容，可对钙，汞，RNA等许多小分子进行快速，可重复的定量分析。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供AAT的最新资讯及产品。
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货号 | 20500 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 10×50 ug | 价格 | 1944 | |
| Ex (nm) | 498 | Em (nm) | 517 | |
| 分子量 | 1147.18 | 溶剂 | Water | |
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
钙离子荧光探针Cal Green 1,六钾盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，Cal Green 1（AAT Bioquest）与Calcium Green-1（Invitrogen）相同。 结合钙离子后，荧光强度增加。 不渗透细胞的染料Cal Green 1（Calcium Green-1）是可激发488 nm的钙指示剂。 与Fluo-3相比，Cal Green-1在低钙浓度下更具荧光性，有助于确定基线钙水平并增加静息细胞的可见度。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针Cal Green 1,六钾盐。
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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针
产品说明书
钙指示剂AM Esters的使用
1.带有钙指示剂AM酯：
AM酯是非极性酯，很容易穿过活细胞膜，并被活细胞内的细胞酯酶迅速水解。AM酯被广泛用于无创地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须特别注意，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）进行重构。DMSO储备溶液应在-20°C的干燥环境中保存，并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。
以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南，应根据您的特定需求进行修改。
a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯储备溶液。
b）在实验当天，将固体的钙指示剂溶解在DMSO中，或将等分的指示剂储备溶液解冻至室温。在您选择的含0.04％Pluronic®F-127的缓冲液（例如Hanks and Hepes缓冲液）中，准备2至20 µM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。必须根据经验确定细胞加载所需指示剂的确切浓度。为避免因过载和潜在的染料毒性而导致的任何伪影，建议使用可以产生足够信号强度的最小探针浓度。
c）如果您的细胞（例如CHO细胞）中含有有机阴离子转运蛋白，则可以将丙磺舒（2–5 mM）或亚砜吡嗪（0.2–0.5 mM）添加到染料工作溶液中（最终孔浓度为1）丙磺舒为-2.5 mM，亚磺酰吡嗪为0.1 -0.25 mM，以减少去酯化指示剂的泄漏。
d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）添加到细胞板中。
e）在温度或37°C下将染料加载板室孵育20分钟（尤其是Fluo-8 AM）至2小时，然后在室温下将板孵育30分钟。
注1：降低加载温度可能会减少指示器的分隔。
注2：将Cal-520 AM孵育2小时以上，对于某些细胞系会产生更好的信号强度。
f）用HHBS或您选择的缓冲液（包含阴离子转运蛋白抑制剂，如1 mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以除去过量的探针。
g）在所需的Ex / Em波长下运行实验。
2.测量细胞内钙响应
为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：
[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]
其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。
解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。
参考文献
Microscopic imaging of intracellular calcium in live cells using lifetime-based ratiometric measurements of Oregon Green BAPTA-1
Authors: Lattarulo C, Thyssen D, Kuchibholta KV, Hyman BT, Bacskaiq BJ.
Journal: Methods Mol Biol (2011): 377
An ensemble and single-molecule fluorescence spectroscopy investigation of Calcium Green 1, a calcium-ion sensor
Authors: Lu Y, Paige MF.
Journal: J Fluoresc (2007): 739
Calcium Green FlAsH as a genetically targeted small-molecule calcium indicator
Authors: Tour O, Adams SR, Kerr RA, Meijer RM, Sejnowski TJ, Tsien RW, Tsien RY.
Journal: Nat Chem Biol (2007): 423
Measurement of intracellular calcium levels by the fluorescent Ca2+ indicator Calcium-Green
Authors: Silei V, Fabrizi C, Venturini G, Tagliavini F, Salmona M, Bugiani O, Lauro GM.
Journal: Brain Res Brain Res Protoc (2000): 132
Monitoring of Ca2+ release from intracellular stores in permeabilized rat parotid acinar cells using the fluorescent indicators Mag-fura-2 and calcium green C18
Authors: Tojyo Y, Tanimura A, Matsumoto Y.
Journal: Biochem Biophys Res Commun (1997): 189
Optical imaging of neuronal activity in tissue labeled by retrograde transport of Calcium Green Dextran
Authors: McPherson DR, McClellan AD, O’Donovan MJ.
Journal: Brain Res Brain Res Protoc (1997): 157
Modulation of an Intracellular Calmodulin-Stimulated Ca2+-Pumping ATPase in Cauliflower by Trypsin (The Use of Calcium Green-5N to Measure Ca2+ Transport in Membrane Vesicles)
Authors: Askerlund P.
Journal: Plant Physiol (1996): 913
A method for recording intracellular [Ca2+] transients in cardiac myocytes using calcium green-2
Authors: Spencer CI, Berlin JR.
Journal: Pflugers Arch (1995): 579
Characterization of calcium translocation across the plasma membrane of primary osteoblasts using a lipophilic calcium-sensitive fluorescent dye, calcium green C18
Authors: Lloyd QP, Kuhn MA, Gay CV.
Journal: J Biol Chem (1995): 22445
Calcium green-5N, a novel fluorescent probe for monitoring high intracellular free Ca2+ concentrations associated with glutamate excitotoxicity in cultured rat brain neurons
Authors: Rajdev S, Reynolds IJ.
Journal: Neurosci Lett (1993): 149
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货号 | 20501 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 10×50 ug | 价格 | 1944 | |
| Ex (nm) | 498 | Em (nm) | 517 | |
| 分子量 | 1290.96 | 溶剂 | DMSO | |
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
产品基本信息
货号：20501
产品名称：钙离子荧光探针Cal Green 1, AM
规格：10×50 ug
储存条件：-15℃避光防潮
保质期：24个月
产品物理化学光谱特性
分子量：1290.96
溶剂：DMSO
激发波长(nm)：506
发射波长(nm)：531
适用仪器
| 荧光显微镜 | |
| 激发： | FITC |
| 发射： | FITC |
| 推荐孔板： | 黑色透明 |
| 荧光酶标仪 | |
| 激发： | 490nm |
| 发射： | 525nm |
| cutoff: | 515nm |
| 推荐孔板： | 黑色透明 |
| 读取模式： | 底读模式 |
产品介绍
钙离子荧光探针Cal Green 1, AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，Cal Green 1（AAT Bioquest）与Calcium Green-1（Invitrogen）相同。结合钙离子后，荧光强度增加。渗透细胞的染料Cal Green 1 AM（Calcium Green-1 AM）是可激发488 nm的钙指示剂。与Fluo-3 AM相比，Cal Green-1 AM在细胞中低钙浓度下更具荧光性，有助于确定基线钙水平并增加静息细胞的可见度。它已被用于许多钙信号研究中，包括在钙流入和释放后测量细胞内钙，以及活组织中钙的多光子激发成像。通过将溶解的指示剂直接添加到培养基中的培养细胞中，可以为细胞加载Cal Green-1 AM。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针Cal Green 1, AM。
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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针
参考文献
Binding to carboxypeptidase M mediates protective effects of fibrinopeptide Bβ (15-42)
Authors: Inga Sörensen-Zender, Rongjun Chen, Rong Song, Sascha David, Anette Melk, Hermann Haller, Roland Schmitt
Journal: Translational Research (2019)
Variations of Intracellular Ca $^{}${$2$}$ $ Mobilization Initiated by Nanosecond and Microsecond Electrical Pulses in HeLa Cells
Authors: Nobuaki Ohnishi, Yusuke Fujiwara, Taichi Kamezaki, Sunao Katsuki
Journal: IEEE Transactions on Biomedical Engineering (2018)
Tuning the Color Palette of Fluorescent Copper Sensors through Systematic Heteroatom Substitution at Rhodol Cores
Authors: Shang Jia, Karla M Ramos-Torres, Safacan Kolemen, Cheri M Ackerman, Christopher J Chang
Journal: (2017)
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货号 | 20502 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 1 mg | 价格 | 2604 | |
| Ex (nm) | 498 | Em (nm) | 517 | |
| 分子量 | 1290.96 | 溶剂 | DMSO | |
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
产品基本信息
货号：20502
产品名称：钙离子荧光探针Cal Green 1, AM
规格：1mg
储存条件：-15℃避光防潮
保质期：24个月
产品物理化学光谱特性
分子量：1290.96
溶剂：DMSO
激发波长(nm)：506
发射波长(nm)：531
适用仪器
| 荧光显微镜 | |
| 激发： | FITC |
| 发射： | FITC |
| 推荐孔板： | 黑色透明 |
| 荧光酶标仪 | |
| 激发： | 490nm |
| 发射： | 525nm |
| cutoff: | 515nm |
| 推荐孔板： | 黑色透明 |
| 读取模式： | 底读模式 |
产品介绍
钙离子荧光探针Cal Green 1, AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，Cal Green 1（AAT Bioquest）与Calcium Green-1（Invitrogen）相同。结合钙离子后，荧光强度增加。渗透细胞的染料Cal Green 1 AM（Calcium Green-1 AM）是可激发488 nm的钙指示剂。与Fluo-3 AM相比，Cal Green-1 AM在细胞中低钙浓度下更具荧光性，有助于确定基线钙水平并增加静息细胞的可见度。它已被用于许多钙信号研究中，包括在钙流入和释放后测量细胞内钙，以及活组织中钙的多光子激发成像。通过将溶解的指示剂直接添加到培养基中的培养细胞中，可以为细胞加载Cal Green-1 AM。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针Cal Green 1, AM。
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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针
参考文献
Binding to carboxypeptidase M mediates protective effects of fibrinopeptide Bβ (15-42)
Authors: Inga Sörensen-Zender, Rongjun Chen, Rong Song, Sascha David, Anette Melk, Hermann Haller, Roland Schmitt
Journal: Translational Research (2019)
Variations of Intracellular Ca $^{}${$2$}$ $ Mobilization Initiated by Nanosecond and Microsecond Electrical Pulses in HeLa Cells
Authors: Nobuaki Ohnishi, Yusuke Fujiwara, Taichi Kamezaki, Sunao Katsuki
Journal: IEEE Transactions on Biomedical Engineering (2018)
Tuning the Color Palette of Fluorescent Copper Sensors through Systematic Heteroatom Substitution at Rhodol Cores
Authors: Shang Jia, Karla M Ramos-Torres, Safacan Kolemen, Cheri M Ackerman, Christopher J Chang
Journal: (2017)
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货号 | 11299 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 500 Tests | 价格 | 3924 | |
| Ex (nm) | 571 | Em (nm) | 584 | |
| 分子量 | 溶剂 | |||
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
Amplite 比色法葡萄糖氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于定量蛋白的试剂盒，葡萄糖氧化酶是二聚体蛋白质，其催化β-D-葡萄糖氧化成过氧化氢和D-葡糖酸-1,5-内酯，其被水解成葡糖酸。 它广泛用于测定体液中的葡萄糖以及从饮料，食品和其他农产品中去除残留的葡萄糖和氧气。 此外，葡萄糖氧化酶通常用于生物传感器中以检测葡萄糖。 Amplite 葡萄糖氧化酶检测试剂盒为溶液中葡萄糖氧化酶的测量提供了一种快速而灵敏的方法。 它可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且很容易适应自动化而无需分离步骤。 该试剂盒使用我们的Amplite Red底物，可使用570 nm的吸光度酶标仪进行监测。 使用Amplite 比色葡萄糖氧化酶检测试剂盒，我们检测到低至12.5 mU / mL的葡萄糖氧化酶。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 比色法葡萄糖氧化酶检测试剂盒。
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适用仪器
| 光吸收酶标仪 | |
| 吸收： | 570nm |
| 推荐孔板： | 透明底板 |
产品说明书
样品实验方案
简要概述
1.准备工作溶液（50μL）
2.添加葡萄糖氧化酶标准品或测试样品（50μL）
3.在37°C孵育10-30分钟
4.监测OD = 570nm处的吸光度
溶液制备
1.储备溶液
所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1 Amplite 红色储备液（250X）：
将100μLDMSO（组分E）加入到Amplite Red（组分A）的小瓶中。注意：在硫醇如二硫苏糖醇（DTT）和2-巯基乙醇存在下，Amplite Red不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的最终浓度应不高于10μM。 Amplite Red在高pH（> 8.5）下也不稳定。因此，反应应在pH 7-8下进行。推荐提供的测定缓冲液（pH 7.4）。
1.2 HRP库存解决方案（50X）：
将1mL测定缓冲液（组分B）加入到辣根过氧化物酶（组分C）的小瓶中。
1.3 葡萄糖氧化酶原液（100 U / mL）：
将1mL测定缓冲液（组分B）加入葡萄糖氧化酶（组分D）的小瓶中。
1.4 葡萄糖原液（10X）：
将5mL测定缓冲液（组分B）加入葡萄糖小瓶（组分F）中。
2.标准溶液
葡萄糖氧化酶标准
通过将2μL的100U / mL葡萄糖氧化酶储备溶液稀释到200μL测定缓冲液（组分B）中来制备葡萄糖氧化酶标准品，以具有1000mU / mL葡萄糖氧化酶标准溶液。 然后进行1：100连续稀释，然后进行1：2连续稀释，得到连续稀释的葡萄糖氧化酶标准品，从10 mU / mL至0.156 mU / mL（GOS1 – GOS7）。
3.工作溶液
将20μLDelterite Red储备液（250X），100μLHRP储备液（50X）和500μL葡萄糖储备液（10X）加入4.3 mL分析缓冲液（组分B）中，制成5 mL工作溶液。
样品分析
表1.透明底96孔微孔板中葡萄糖氧化酶标准品和测试样品的布局。 GOS =葡萄糖氧化酶标准品（GOS1-GOS7,0.156至10mU / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。
| BL | BL | TS | TS |
| GOS1 | GOS1 | … | … |
| GOS2 | GOS2 | … | … |
| GOS3 | GOS3 | ||
| GOS4 | GOS4 | ||
| GOS5 | GOS5 | ||
| GOS6 | GOS6 | ||
| GOS7 | GOS7 |
表2.每个孔的试剂组成
| 孔 | 容积 | 试剂 |
| GOS1-GOS7 | 50ul | 连续稀释（0.156至10 mU / mL） |
| BL | 50ul | 分析缓冲液（组分B） |
| TS | 50ul | 测试样本 |
1.根据表1和2中提供的布局制备葡萄糖氧化酶标准品（GOS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。
2.向葡萄糖氧化酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL工作溶液，使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLGO工作溶液，总体积为50μL/孔。
3.将反应在37°C孵育10至30分钟，避光。
4.用OD = 570nm的吸光度板读数器监测吸光度的增加。
参考文献
A reassessment of the carnivorous status of salmonids: Hepatic glucokinase is expressed in wild fish in Kerguelen Islands
Authors: Lucie Marandel, Philippe Gaudin, Frančois Guéraud, Stéphane Glise, Alexandre Herman, Elisabeth Plagnes-Juan, Vincent Véron, Stéphane Panserat, Jacques Labonne
Journal: Science of The Total Environment (2018): 276–285
Overcoming 5-Fu resistance in human non-small cell lung cancer cells by the combination of 5-Fu and cisplatin through the inhibition of glucose metabolism
Authors: Jun-gang Zhao, Kai-ming Ren, Jun Tang
Journal: Tumor Biology (2014): 12305–12315
相关产品
| 产品名称 | 货号 |
| Amplite 比色法黄嘌呤氧化酶检测试剂盒 | Cat#11307 |
| Amplite 荧光法葡萄糖氧化酶检测试剂盒 | Cat#11300 |
| Amplite NADPH检测试剂盒(比色法) | Cat#15272 |
上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
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货号 | 71650 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 1 mg | 价格 | 3612 | |
| Ex (nm) | 586 | Em (nm) | 601 | |
| 分子量 | 1436.72 | 溶剂 | DMSO | |
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
荧光染料缀合抗体是许多应用中鉴定蛋白质的一种工具，包括荧光细胞成像、流式细胞术、蛋白质印迹、免疫组织化学等。使用荧光标记抗体的优势包括更高的灵敏度、多路复用能力和易用性。 iFluor Ultra 系列是我们广受欢迎的 iFluor 染料的最新升级版，并针对用于荧光成像和流式细胞术应用的标记抗体进行了优化。用 iFluor Ultra 594 制备的抗体缀合物远远优于其他现有类似染料的缀合物，如 Alexa Fluor® 594。iFluor Ultra 594 缀合物在相同条件下比用 Alexa Fluor® 594 制备的缀合物更亮。此外，iFluor Ultra 594 的荧光不受 pH (4-10) 的影响。 iFluor Ultra 594 SE 染料相当稳定，并表现出与蛋白质氨基的良好反应性和选择性。 iFluor Ultra 594 的光谱特性和反应性类似于 Alexa Fluor® 594（Alexa Fluor® 是 ThermoFisher 的商标）。
产品说明书
实验方案
储备溶液配制
1. 蛋白质原液（溶液 A）
将 100 µL 反应缓冲液（例如，1 M 碳酸钠溶液或 1 M 磷酸盐缓冲液，pH ~ 9.0）与 900 µL 目标蛋白溶液（例如抗体，如果可能，蛋白质浓度 >2 mg/mL）混合，得到 1 mL 蛋白质标记原液。
注意：蛋白质溶液（溶液 A）的 pH 值应为 8.5 ± 0.5。如果蛋白质溶液的 pH 值低于 8.0，则使用 1 M 碳酸氢钠溶液或 1 M pH 9.0 磷酸盐缓冲液将 pH 值调整到 8.0-9.0 的范围内。
注意：蛋白质应溶于1X 磷酸盐缓冲盐水 (PBS)，pH 7.2-7.4。如果蛋白质溶解在 Tris 或甘氨酸缓冲液中，则必须用 1X PBS，pH 7.2-7.4 进行透析，以去除用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（如硫酸铵和醋酸铵）。
注意：如果蛋白质浓度低于 2 mg/mL，缀合效率会显着降低。为获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为 2-10 mg/mL。
2. iFluor Ultra 594 SE 原液（溶液 B）
将无水 DMSO 添加到 iFluor Ultra 594 SE 小瓶中，制成 10 mM 储备溶液。通过移液或涡旋混合均匀。
注意：在开始缀合之前准备染料储备溶液（溶液 B），并及时使用。染料原液的长期储存可能会降低染料活性。溶液 B 在避光和防潮的情况下可以在冰箱中储存两周，避免冻融循环。
操作步骤
该标记方案是为山羊抗小鼠 IgG 与 iFluor Ultra 594 SE 的缀合而开发的。 您可能需要进一步优化您的特定蛋白质。
注意：每种蛋白质需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的特性。 蛋白质的过度标记会对其缀合亲和力产生不利影响，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。
1.进行缀合反应
1.1使用 10:1 的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）的摩尔比作为起点：将 5 μL 的染料储备溶液（溶液 B，假设染料储备溶液为 10 mM）在有效摇动下倒入蛋白质溶液（95 µL 溶液 A）小瓶中。 假设蛋白质浓度为 10 mg/mL 且蛋白质的分子量为 ~200KD，则蛋白质的浓度为 ~0.05 mM。
注意：我们建议使用 10:1 摩尔比的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）。 如果太低或太高，分别确定最佳染料/蛋白质比例为 5:1、15:1 和 20:1。
1.2在室温下继续旋转或摇动反应混合物 30-60 分钟。
2.纯化缀合物
以下方案是使用 Sephadex G-25 柱进行染料-蛋白质缀合物纯化的示例。
根据制造说明准备 Sephadex G-25 柱。
2.1将反应混合物（来自“1.进行缀合反应”）加载到 Sephadex G-25 列的顶部。
2.2样品刚好在顶部树脂表面下方运行时，立即添加 PBS (pH 7.2-7.4)。
2.3向所需样品中添加更多 PBS (pH 7.2-7.4) 以完成柱纯化。 结合含有所需染料-蛋白质偶联物的组分。
注意：要立即使用，染料-蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并分装多次使用。
注意：对于长期储存，染料-蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。
3.数据处理
3.1表征所需的染料-蛋白质缀合物
取代度 (DOS) 是表征染料标记蛋白质的最重要因素。 较低 DOS 的蛋白质通常具有较弱的荧光强度，但较高 DOS 的蛋白质（例如 DOS > 6）也往往具有较低的荧光强度。 大多数抗体的最佳 DOS 建议在 2 到 10 之间，具体取决于染料和蛋白质的特性。 为了有效标记，应控制取代度，使 6-8 摩尔 iFluor Ultra 594 SE 对 1 摩尔抗体。 以下步骤用于确定 iFluor Ultra 594 SE 标记蛋白质的 DOS。
3.2吸收检测
要检测染料-蛋白质缀合物的吸收光谱，建议将样品浓度保持在 1-10 µM 的范围内，具体取决于染料的消光系数。
3.3读取 280 nm 处的 OD（吸光度）和染料最大吸光度（对于 iFluor Ultra 594 染料，ƛmax = 588 nm）
对于大多数分光光度计，样品（来自色谱柱馏分）需要用去离子水稀释，以便 OD 值在 0.1 到 0.9 的范围内。 OD（吸光度）在 280 nm 是蛋白质的最大吸收，而 588 nm 是 iFluor Ultra 594 SE 的最大吸收。 要获得准确的 DOS，请确保缀合物中不含非结合染料。
3.4计算DOS
您可以通过链接使用我们的工具计算DOS
参考文献
A fully integrated isotachophoresis with a programmable microfluidic platform.
Authors: Shebindu, Adam and Somaweera, Himali and Estlack, Zachary and Kim, Jungtae and Kim, Jungkyu
Journal: Talanta (2021): 122039
Effect of VIRP1 Protein on Nuclear Import of Citrus Exocortis Viroid (CEVd).
Authors: Seo, Hyesu and Kim, Kyunghee and Park, Woong June
Journal: Biomolecules (2021)
Liquid Droplet Formation and Facile Cytosolic Translocation of IgG in the Presence of Attenuated Cationic Amphiphilic Lytic Peptides.
Authors: Iwata, Takahiro and Hirose, Hisaaki and Sakamoto, Kentarou and Hirai, Yusuke and Arafiles, Jan Vincent V and Akishiba, Misao and Imanishi, Miki and Futaki, Shiroh
Journal: Angewandte Chemie (International ed. in English) (2021)
MicroRNA-126 inhibits pathological retinal neovascularization via suppressing vascular endothelial growth factor expression in a rat model of retinopathy of prematurity.
Authors: Fan, Yuan-Yao and Liu, Chi-Hsien and Wu, An-Lun and Chen, Hung-Chi and Hsueh, Yi-Jen and Chen, Kuan-Jen and Lai, Chi-Chun and Huang, Chung-Ying and Wu, Wei-Chi
Journal: European journal of pharmacology (2021): 174035
Retinal ganglion cells projecting to superior colliculus and pulvinar in marmoset.
Authors: Grünert, Ulrike and Lee, Sammy C S and Kwan, William C and Mundinano, Inaki-Carril and Bourne, James A and Martin, Paul R
Journal: Brain structure & function (2021)
Fluorescently-labeled fremanezumab is distributed to sensory and autonomic ganglia and the dura but not to the brain of rats with uncompromised blood brain barrier.
Authors: Noseda, Rodrigo and Schain, Aaron J and Melo-Carrillo, Agustin and Tien, Jason and Stratton, Jennifer and Mai, Fanny and Strassman, Andrew M and Burstein, Rami
Journal: Cephalalgia : an international journal of headache (2020): 229-240
Modeling iontophoretic drug delivery in a microfluidic device.
Authors: Moarefian, Maryam and Davalos, Rafael V and Tafti, Danesh K and Achenie, Luke E and Jones, Caroline N
Journal: Lab on a chip (2020): 3310-3321
Cell-based immunofluorescence assay for screening the neurogenesis potential of new drugs in adult hippocampal neural progenitor cells.
Authors: Zhang, Kun and Li, Bin and Li, Peifang and Yang, Xiaoli and Cui, Huixian and Liu, Xiaoyun
Journal: Acta neurobiologiae experimentalis (2019): 302-308
Super blinking and biocompatible nanoprobes based on dye doped BSA nanoparticles for super resolution imaging.
Authors: Zong, Shenfei and Pan, Fengmei and Zhang, Ruohu and Chen, Chen and Wang, Zhuyuan and Cui, Yiping
Journal: Nanotechnology (2019): 065701
[Sepsis impairs aggregation of nicotinic acetylcholine receptors on murine skeletal muscle cell membranes by inhibiting AKT/GSK3β phosphorylation].
Authors: Li, Tianmei and Liu, Li and Wang, Xiaobin
Journal: Nan fang yi ke da xue xue bao = Journal of Southern Medical University (2019): 1337-1343
上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
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货号 | 71680 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 1 mg | 价格 | 3612 | |
| Ex (nm) | 749 | Em (nm) | 773 | |
| 分子量 | 1426.78 | 溶剂 | DMSO | |
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
荧光染料缀合抗体是许多应用中鉴定蛋白质的一种工具，包括荧光细胞成像、流式细胞术、蛋白质印迹、免疫组织化学等。使用荧光标记抗体的优势包括更高的灵敏度、多路复用能力和易用性。 iFluor Ultra 系列是我们广受欢迎的 iFluor 染料的最新升级版，并针对用于荧光成像和流式细胞术应用的标记抗体进行了优化。用 iFluor Ultra 750 制备的抗体缀合物远远优于其他现有类似染料的缀合物，如 Alexa Fluor® 750。iFluor Ultra 750 缀合物在相同条件下比用 Alexa Fluor® 750 制备的缀合物更亮。此外，iFluor Ultra 750 的荧光不受 pH (4-10) 的影响。 iFluor Ultra 750 SE 染料相当稳定，并表现出与蛋白质氨基的良好反应性和选择性。 iFluor Ultra 750 的光谱特性和反应性类似于 Alexa Fluor® 750（Alexa Fluor® 是 ThermoFisher 的商标）。
产品说明书
实验方案
储备溶液配制
1. 蛋白质原液（溶液 A）
将 100 µL 反应缓冲液（例如，1 M 碳酸钠溶液或 1 M 磷酸盐缓冲液，pH ~ 9.0）与 900 µL 目标蛋白溶液（例如抗体，如果可能，蛋白质浓度 >2 mg/mL）混合，得到 1 mL 蛋白质标记原液。
注意：蛋白质溶液（溶液 A）的 pH 值应为 8.5 ± 0.5。如果蛋白质溶液的 pH 值低于 8.0，则使用 1 M 碳酸氢钠溶液或 1 M pH 9.0 磷酸盐缓冲液将 pH 值调整到 8.0-9.0 的范围内。
注意：蛋白质应溶于1X 磷酸盐缓冲盐水 (PBS)，pH 7.2-7.4。如果蛋白质溶解在 Tris 或甘氨酸缓冲液中，则必须用 1X PBS，pH 7.2-7.4 进行透析，以去除用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（如硫酸铵和醋酸铵）。
注意：如果蛋白质浓度低于 2 mg/mL，缀合效率会显着降低。为获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为 2-10 mg/mL。
2. iFluor Ultra 750 SE 原液（溶液 B）
将无水 DMSO 添加到 iFluor Ultra 750 SE 小瓶中，制成 10 mM 储备溶液。通过移液或涡旋混合均匀。
注意：在开始缀合之前准备染料储备溶液（溶液 B），并及时使用。染料原液的长期储存可能会降低染料活性。溶液 B 在避光和防潮的情况下可以在冰箱中储存两周，避免冻融循环。
操作步骤
该标记方案是为山羊抗小鼠 IgG 与 iFluor Ultra 750 SE 的缀合而开发的。 您可能需要进一步优化您的特定蛋白质。
注意：每种蛋白质需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的特性。 蛋白质的过度标记会对其缀合亲和力产生不利影响，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。
1.进行缀合反应
1.1使用 10:1 的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）的摩尔比作为起点：将 5 μL 的染料储备溶液（溶液 B，假设染料储备溶液为 10 mM）在有效摇动下倒入蛋白质溶液（95 µL 溶液 A）小瓶中。 假设蛋白质浓度为 10 mg/mL 且蛋白质的分子量为 ~200KD，则蛋白质的浓度为 ~0.05 mM。
注意：我们建议使用 10:1 摩尔比的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）。 如果太低或太高，分别确定最佳染料/蛋白质比例为 5:1、15:1 和 20:1。
1.2在室温下继续旋转或摇动反应混合物 30-60 分钟。
2.纯化缀合物
以下方案是使用 Sephadex G-25 柱进行染料-蛋白质缀合物纯化的示例。
根据制造说明准备 Sephadex G-25 柱。
2.1将反应混合物（来自“1.进行缀合反应”）加载到 Sephadex G-25 列的顶部。
2.2样品刚好在顶部树脂表面下方运行时，立即添加 PBS (pH 7.2-7.4)。
2.3向所需样品中添加更多 PBS (pH 7.2-7.4) 以完成柱纯化。 结合含有所需染料-蛋白质偶联物的组分。
注意：要立即使用，染料-蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并分装多次使用。
注意：对于长期储存，染料-蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。
3.数据处理
3.1表征所需的染料-蛋白质缀合物
取代度 (DOS) 是表征染料标记蛋白质的最重要因素。 较低 DOS 的蛋白质通常具有较弱的荧光强度，但较高 DOS 的蛋白质（例如 DOS > 6）也往往具有较低的荧光强度。 大多数抗体的最佳 DOS 建议在 2 到 10 之间，具体取决于染料和蛋白质的特性。 为了有效标记，应控制取代度，使 6-8 摩尔 iFluor Ultra 750 SE 对 1 摩尔抗体。 以下步骤用于确定 iFluor Ultra 750 SE 标记蛋白质的 DOS。
3.2吸收检测
要检测染料-蛋白质缀合物的吸收光谱，建议将样品浓度保持在 1-10 µM 的范围内，具体取决于染料的消光系数。
3.3读取 280 nm 处的 OD（吸光度）和染料最大吸光度（对于 iFluor Ultra 750 染料，ƛmax = 588 nm）
对于大多数分光光度计，样品（来自色谱柱馏分）需要用去离子水稀释，以便 OD 值在 0.1 到 0.9 的范围内。 OD（吸光度）在 280 nm 是蛋白质的最大吸收，而 588 nm 是 iFluor Ultra 750 SE 的最大吸收。 要获得准确的 DOS，请确保缀合物中不含非结合染料。
3.4计算DOS
您可以通过链接使用我们的工具计算DOS
参考文献
A fully integrated isotachophoresis with a programmable microfluidic platform.
Authors: Shebindu, Adam and Somaweera, Himali and Estlack, Zachary and Kim, Jungtae and Kim, Jungkyu
Journal: Talanta (2021): 122039
Effect of VIRP1 Protein on Nuclear Import of Citrus Exocortis Viroid (CEVd).
Authors: Seo, Hyesu and Kim, Kyunghee and Park, Woong June
Journal: Biomolecules (2021)
Liquid Droplet Formation and Facile Cytosolic Translocation of IgG in the Presence of Attenuated Cationic Amphiphilic Lytic Peptides.
Authors: Iwata, Takahiro and Hirose, Hisaaki and Sakamoto, Kentarou and Hirai, Yusuke and Arafiles, Jan Vincent V and Akishiba, Misao and Imanishi, Miki and Futaki, Shiroh
Journal: Angewandte Chemie (International ed. in English) (2021)
MicroRNA-126 inhibits pathological retinal neovascularization via suppressing vascular endothelial growth factor expression in a rat model of retinopathy of prematurity.
Authors: Fan, Yuan-Yao and Liu, Chi-Hsien and Wu, An-Lun and Chen, Hung-Chi and Hsueh, Yi-Jen and Chen, Kuan-Jen and Lai, Chi-Chun and Huang, Chung-Ying and Wu, Wei-Chi
Journal: European journal of pharmacology (2021): 174035
Retinal ganglion cells projecting to superior colliculus and pulvinar in marmoset.
Authors: Grünert, Ulrike and Lee, Sammy C S and Kwan, William C and Mundinano, Inaki-Carril and Bourne, James A and Martin, Paul R
Journal: Brain structure & function (2021)
Fluorescently-labeled fremanezumab is distributed to sensory and autonomic ganglia and the dura but not to the brain of rats with uncompromised blood brain barrier.
Authors: Noseda, Rodrigo and Schain, Aaron J and Melo-Carrillo, Agustin and Tien, Jason and Stratton, Jennifer and Mai, Fanny and Strassman, Andrew M and Burstein, Rami
Journal: Cephalalgia : an international journal of headache (2020): 229-240
Modeling iontophoretic drug delivery in a microfluidic device.
Authors: Moarefian, Maryam and Davalos, Rafael V and Tafti, Danesh K and Achenie, Luke E and Jones, Caroline N
Journal: Lab on a chip (2020): 3310-3321
Cell-based immunofluorescence assay for screening the neurogenesis potential of new drugs in adult hippocampal neural progenitor cells.
Authors: Zhang, Kun and Li, Bin and Li, Peifang and Yang, Xiaoli and Cui, Huixian and Liu, Xiaoyun
Journal: Acta neurobiologiae experimentalis (2019): 302-308
Super blinking and biocompatible nanoprobes based on dye doped BSA nanoparticles for super resolution imaging.
Authors: Zong, Shenfei and Pan, Fengmei and Zhang, Ruohu and Chen, Chen and Wang, Zhuyuan and Cui, Yiping
Journal: Nanotechnology (2019): 065701
[Sepsis impairs aggregation of nicotinic acetylcholine receptors on murine skeletal muscle cell membranes by inhibiting AKT/GSK3β phosphorylation].
Authors: Li, Tianmei and Liu, Li and Wang, Xiaobin
Journal: Nan fang yi ke da xue xue bao = Journal of Southern Medical University (2019): 1337-1343
上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
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货号 | 71681 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 100 ug | 价格 | 1164 | |
| Ex (nm) | 749 | Em (nm) | 773 | |
| 分子量 | 1426.78 | 溶剂 | DMSO | |
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
荧光染料缀合抗体是许多应用中鉴定蛋白质的一种工具，包括荧光细胞成像、流式细胞术、蛋白质印迹、免疫组织化学等。使用荧光标记抗体的优势包括更高的灵敏度、多路复用能力和易用性。 iFluor Ultra 系列是我们广受欢迎的 iFluor 染料的最新升级版，并针对用于荧光成像和流式细胞术应用的标记抗体进行了优化。用 iFluor Ultra 750 制备的抗体缀合物远远优于其他现有类似染料的缀合物，如 Alexa Fluor® 750。iFluor Ultra 750 缀合物在相同条件下比用 Alexa Fluor® 750 制备的缀合物更亮。此外，iFluor Ultra 750 的荧光不受 pH (4-10) 的影响。 iFluor Ultra 750 SE 染料相当稳定，并表现出与蛋白质氨基的良好反应性和选择性。 iFluor Ultra 750 的光谱特性和反应性类似于 Alexa Fluor® 750（Alexa Fluor® 是 ThermoFisher 的商标）。
产品说明书
实验方案
储备溶液配制
1. 蛋白质原液（溶液 A）
将 100 µL 反应缓冲液（例如，1 M 碳酸钠溶液或 1 M 磷酸盐缓冲液，pH ~ 9.0）与 900 µL 目标蛋白溶液（例如抗体，如果可能，蛋白质浓度 >2 mg/mL）混合，得到 1 mL 蛋白质标记原液。
注意：蛋白质溶液（溶液 A）的 pH 值应为 8.5 ± 0.5。如果蛋白质溶液的 pH 值低于 8.0，则使用 1 M 碳酸氢钠溶液或 1 M pH 9.0 磷酸盐缓冲液将 pH 值调整到 8.0-9.0 的范围内。
注意：蛋白质应溶于1X 磷酸盐缓冲盐水 (PBS)，pH 7.2-7.4。如果蛋白质溶解在 Tris 或甘氨酸缓冲液中，则必须用 1X PBS，pH 7.2-7.4 进行透析，以去除用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（如硫酸铵和醋酸铵）。
注意：如果蛋白质浓度低于 2 mg/mL，缀合效率会显着降低。为获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为 2-10 mg/mL。
2. iFluor Ultra 750 SE 原液（溶液 B）
将无水 DMSO 添加到 iFluor Ultra 750 SE 小瓶中，制成 10 mM 储备溶液。通过移液或涡旋混合均匀。
注意：在开始缀合之前准备染料储备溶液（溶液 B），并及时使用。染料原液的长期储存可能会降低染料活性。溶液 B 在避光和防潮的情况下可以在冰箱中储存两周，避免冻融循环。
操作步骤
该标记方案是为山羊抗小鼠 IgG 与 iFluor Ultra 750 SE 的缀合而开发的。 您可能需要进一步优化您的特定蛋白质。
注意：每种蛋白质需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的特性。 蛋白质的过度标记会对其缀合亲和力产生不利影响，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。
1.进行缀合反应
1.1使用 10:1 的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）的摩尔比作为起点：将 5 μL 的染料储备溶液（溶液 B，假设染料储备溶液为 10 mM）在有效摇动下倒入蛋白质溶液（95 µL 溶液 A）小瓶中。 假设蛋白质浓度为 10 mg/mL 且蛋白质的分子量为 ~200KD，则蛋白质的浓度为 ~0.05 mM。
注意：我们建议使用 10:1 摩尔比的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）。 如果太低或太高，分别确定最佳染料/蛋白质比例为 5:1、15:1 和 20:1。
1.2在室温下继续旋转或摇动反应混合物 30-60 分钟。
2.纯化缀合物
以下方案是使用 Sephadex G-25 柱进行染料-蛋白质缀合物纯化的示例。
根据制造说明准备 Sephadex G-25 柱。
2.1将反应混合物（来自“1.进行缀合反应”）加载到 Sephadex G-25 列的顶部。
2.2样品刚好在顶部树脂表面下方运行时，立即添加 PBS (pH 7.2-7.4)。
2.3向所需样品中添加更多 PBS (pH 7.2-7.4) 以完成柱纯化。 结合含有所需染料-蛋白质偶联物的组分。
注意：要立即使用，染料-蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并分装多次使用。
注意：对于长期储存，染料-蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。
3.数据处理
3.1表征所需的染料-蛋白质缀合物
取代度 (DOS) 是表征染料标记蛋白质的最重要因素。 较低 DOS 的蛋白质通常具有较弱的荧光强度，但较高 DOS 的蛋白质（例如 DOS > 6）也往往具有较低的荧光强度。 大多数抗体的最佳 DOS 建议在 2 到 10 之间，具体取决于染料和蛋白质的特性。 为了有效标记，应控制取代度，使 6-8 摩尔 iFluor Ultra 750 SE 对 1 摩尔抗体。 以下步骤用于确定 iFluor Ultra 750 SE 标记蛋白质的 DOS。
3.2吸收检测
要检测染料-蛋白质缀合物的吸收光谱，建议将样品浓度保持在 1-10 µM 的范围内，具体取决于染料的消光系数。
3.3读取 280 nm 处的 OD（吸光度）和染料最大吸光度（对于 iFluor Ultra 750 染料，ƛmax = 588 nm）
对于大多数分光光度计，样品（来自色谱柱馏分）需要用去离子水稀释，以便 OD 值在 0.1 到 0.9 的范围内。 OD（吸光度）在 280 nm 是蛋白质的最大吸收，而 588 nm 是 iFluor Ultra 750 SE 的最大吸收。 要获得准确的 DOS，请确保缀合物中不含非结合染料。
3.4计算DOS
您可以通过链接使用我们的工具计算DOS
参考文献
A fully integrated isotachophoresis with a programmable microfluidic platform.
Authors: Shebindu, Adam and Somaweera, Himali and Estlack, Zachary and Kim, Jungtae and Kim, Jungkyu
Journal: Talanta (2021): 122039
Effect of VIRP1 Protein on Nuclear Import of Citrus Exocortis Viroid (CEVd).
Authors: Seo, Hyesu and Kim, Kyunghee and Park, Woong June
Journal: Biomolecules (2021)
Liquid Droplet Formation and Facile Cytosolic Translocation of IgG in the Presence of Attenuated Cationic Amphiphilic Lytic Peptides.
Authors: Iwata, Takahiro and Hirose, Hisaaki and Sakamoto, Kentarou and Hirai, Yusuke and Arafiles, Jan Vincent V and Akishiba, Misao and Imanishi, Miki and Futaki, Shiroh
Journal: Angewandte Chemie (International ed. in English) (2021)
MicroRNA-126 inhibits pathological retinal neovascularization via suppressing vascular endothelial growth factor expression in a rat model of retinopathy of prematurity.
Authors: Fan, Yuan-Yao and Liu, Chi-Hsien and Wu, An-Lun and Chen, Hung-Chi and Hsueh, Yi-Jen and Chen, Kuan-Jen and Lai, Chi-Chun and Huang, Chung-Ying and Wu, Wei-Chi
Journal: European journal of pharmacology (2021): 174035
Retinal ganglion cells projecting to superior colliculus and pulvinar in marmoset.
Authors: Grünert, Ulrike and Lee, Sammy C S and Kwan, William C and Mundinano, Inaki-Carril and Bourne, James A and Martin, Paul R
Journal: Brain structure & function (2021)
Fluorescently-labeled fremanezumab is distributed to sensory and autonomic ganglia and the dura but not to the brain of rats with uncompromised blood brain barrier.
Authors: Noseda, Rodrigo and Schain, Aaron J and Melo-Carrillo, Agustin and Tien, Jason and Stratton, Jennifer and Mai, Fanny and Strassman, Andrew M and Burstein, Rami
Journal: Cephalalgia : an international journal of headache (2020): 229-240
Modeling iontophoretic drug delivery in a microfluidic device.
Authors: Moarefian, Maryam and Davalos, Rafael V and Tafti, Danesh K and Achenie, Luke E and Jones, Caroline N
Journal: Lab on a chip (2020): 3310-3321
Cell-based immunofluorescence assay for screening the neurogenesis potential of new drugs in adult hippocampal neural progenitor cells.
Authors: Zhang, Kun and Li, Bin and Li, Peifang and Yang, Xiaoli and Cui, Huixian and Liu, Xiaoyun
Journal: Acta neurobiologiae experimentalis (2019): 302-308
Super blinking and biocompatible nanoprobes based on dye doped BSA nanoparticles for super resolution imaging.
Authors: Zong, Shenfei and Pan, Fengmei and Zhang, Ruohu and Chen, Chen and Wang, Zhuyuan and Cui, Yiping
Journal: Nanotechnology (2019): 065701
[Sepsis impairs aggregation of nicotinic acetylcholine receptors on murine skeletal muscle cell membranes by inhibiting AKT/GSK3β phosphorylation].
Authors: Li, Tianmei and Liu, Li and Wang, Xiaobin
Journal: Nan fang yi ke da xue xue bao = Journal of Southern Medical University (2019): 1337-1343
上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
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货号 | 71682 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 5 mg | 价格 | 11628 | |
| Ex (nm) | 749 | Em (nm) | 773 | |
| 分子量 | 1426.78 | 溶剂 | DMSO | |
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
荧光染料缀合抗体是许多应用中鉴定蛋白质的一种工具，包括荧光细胞成像、流式细胞术、蛋白质印迹、免疫组织化学等。使用荧光标记抗体的优势包括更高的灵敏度、多路复用能力和易用性。 iFluor Ultra 系列是我们广受欢迎的 iFluor 染料的最新升级版，并针对用于荧光成像和流式细胞术应用的标记抗体进行了优化。用 iFluor Ultra 750 制备的抗体缀合物远远优于其他现有类似染料的缀合物，如 Alexa Fluor® 750。iFluor Ultra 750 缀合物在相同条件下比用 Alexa Fluor® 750 制备的缀合物更亮。此外，iFluor Ultra 750 的荧光不受 pH (4-10) 的影响。 iFluor Ultra 750 SE 染料相当稳定，并表现出与蛋白质氨基的良好反应性和选择性。 iFluor Ultra 750 的光谱特性和反应性类似于 Alexa Fluor® 750（Alexa Fluor® 是 ThermoFisher 的商标）。
产品说明书
实验方案
储备溶液配制
1. 蛋白质原液（溶液 A）
将 100 µL 反应缓冲液（例如，1 M 碳酸钠溶液或 1 M 磷酸盐缓冲液，pH ~ 9.0）与 900 µL 目标蛋白溶液（例如抗体，如果可能，蛋白质浓度 >2 mg/mL）混合，得到 1 mL 蛋白质标记原液。
注意：蛋白质溶液（溶液 A）的 pH 值应为 8.5 ± 0.5。如果蛋白质溶液的 pH 值低于 8.0，则使用 1 M 碳酸氢钠溶液或 1 M pH 9.0 磷酸盐缓冲液将 pH 值调整到 8.0-9.0 的范围内。
注意：蛋白质应溶于1X 磷酸盐缓冲盐水 (PBS)，pH 7.2-7.4。如果蛋白质溶解在 Tris 或甘氨酸缓冲液中，则必须用 1X PBS，pH 7.2-7.4 进行透析，以去除用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（如硫酸铵和醋酸铵）。
注意：如果蛋白质浓度低于 2 mg/mL，缀合效率会显着降低。为获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为 2-10 mg/mL。
2. iFluor Ultra 750 SE 原液（溶液 B）
将无水 DMSO 添加到 iFluor Ultra 750 SE 小瓶中，制成 10 mM 储备溶液。通过移液或涡旋混合均匀。
注意：在开始缀合之前准备染料储备溶液（溶液 B），并及时使用。染料原液的长期储存可能会降低染料活性。溶液 B 在避光和防潮的情况下可以在冰箱中储存两周，避免冻融循环。
操作步骤
该标记方案是为山羊抗小鼠 IgG 与 iFluor Ultra 750 SE 的缀合而开发的。 您可能需要进一步优化您的特定蛋白质。
注意：每种蛋白质需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的特性。 蛋白质的过度标记会对其缀合亲和力产生不利影响，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。
1.进行缀合反应
1.1使用 10:1 的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）的摩尔比作为起点：将 5 μL 的染料储备溶液（溶液 B，假设染料储备溶液为 10 mM）在有效摇动下倒入蛋白质溶液（95 µL 溶液 A）小瓶中。 假设蛋白质浓度为 10 mg/mL 且蛋白质的分子量为 ~200KD，则蛋白质的浓度为 ~0.05 mM。
注意：我们建议使用 10:1 摩尔比的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）。 如果太低或太高，分别确定最佳染料/蛋白质比例为 5:1、15:1 和 20:1。
1.2在室温下继续旋转或摇动反应混合物 30-60 分钟。
2.纯化缀合物
以下方案是使用 Sephadex G-25 柱进行染料-蛋白质缀合物纯化的示例。
根据制造说明准备 Sephadex G-25 柱。
2.1将反应混合物（来自“1.进行缀合反应”）加载到 Sephadex G-25 列的顶部。
2.2样品刚好在顶部树脂表面下方运行时，立即添加 PBS (pH 7.2-7.4)。
2.3向所需样品中添加更多 PBS (pH 7.2-7.4) 以完成柱纯化。 结合含有所需染料-蛋白质偶联物的组分。
注意：要立即使用，染料-蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并分装多次使用。
注意：对于长期储存，染料-蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。
3.数据处理
3.1表征所需的染料-蛋白质缀合物
取代度 (DOS) 是表征染料标记蛋白质的最重要因素。 较低 DOS 的蛋白质通常具有较弱的荧光强度，但较高 DOS 的蛋白质（例如 DOS > 6）也往往具有较低的荧光强度。 大多数抗体的最佳 DOS 建议在 2 到 10 之间，具体取决于染料和蛋白质的特性。 为了有效标记，应控制取代度，使 6-8 摩尔 iFluor Ultra 750 SE 对 1 摩尔抗体。 以下步骤用于确定 iFluor Ultra 750 SE 标记蛋白质的 DOS。
3.2吸收检测
要检测染料-蛋白质缀合物的吸收光谱，建议将样品浓度保持在 1-10 µM 的范围内，具体取决于染料的消光系数。
3.3读取 280 nm 处的 OD（吸光度）和染料最大吸光度（对于 iFluor Ultra 750 染料，ƛmax = 588 nm）
对于大多数分光光度计，样品（来自色谱柱馏分）需要用去离子水稀释，以便 OD 值在 0.1 到 0.9 的范围内。 OD（吸光度）在 280 nm 是蛋白质的最大吸收，而 588 nm 是 iFluor Ultra 750 SE 的最大吸收。 要获得准确的 DOS，请确保缀合物中不含非结合染料。
3.4计算DOS
您可以通过链接使用我们的工具计算DOS
参考文献
A fully integrated isotachophoresis with a programmable microfluidic platform.
Authors: Shebindu, Adam and Somaweera, Himali and Estlack, Zachary and Kim, Jungtae and Kim, Jungkyu
Journal: Talanta (2021): 122039
Effect of VIRP1 Protein on Nuclear Import of Citrus Exocortis Viroid (CEVd).
Authors: Seo, Hyesu and Kim, Kyunghee and Park, Woong June
Journal: Biomolecules (2021)
Liquid Droplet Formation and Facile Cytosolic Translocation of IgG in the Presence of Attenuated Cationic Amphiphilic Lytic Peptides.
Authors: Iwata, Takahiro and Hirose, Hisaaki and Sakamoto, Kentarou and Hirai, Yusuke and Arafiles, Jan Vincent V and Akishiba, Misao and Imanishi, Miki and Futaki, Shiroh
Journal: Angewandte Chemie (International ed. in English) (2021)
MicroRNA-126 inhibits pathological retinal neovascularization via suppressing vascular endothelial growth factor expression in a rat model of retinopathy of prematurity.
Authors: Fan, Yuan-Yao and Liu, Chi-Hsien and Wu, An-Lun and Chen, Hung-Chi and Hsueh, Yi-Jen and Chen, Kuan-Jen and Lai, Chi-Chun and Huang, Chung-Ying and Wu, Wei-Chi
Journal: European journal of pharmacology (2021): 174035
Retinal ganglion cells projecting to superior colliculus and pulvinar in marmoset.
Authors: Grünert, Ulrike and Lee, Sammy C S and Kwan, William C and Mundinano, Inaki-Carril and Bourne, James A and Martin, Paul R
Journal: Brain structure & function (2021)
Fluorescently-labeled fremanezumab is distributed to sensory and autonomic ganglia and the dura but not to the brain of rats with uncompromised blood brain barrier.
Authors: Noseda, Rodrigo and Schain, Aaron J and Melo-Carrillo, Agustin and Tien, Jason and Stratton, Jennifer and Mai, Fanny and Strassman, Andrew M and Burstein, Rami
Journal: Cephalalgia : an international journal of headache (2020): 229-240
Modeling iontophoretic drug delivery in a microfluidic device.
Authors: Moarefian, Maryam and Davalos, Rafael V and Tafti, Danesh K and Achenie, Luke E and Jones, Caroline N
Journal: Lab on a chip (2020): 3310-3321
Cell-based immunofluorescence assay for screening the neurogenesis potential of new drugs in adult hippocampal neural progenitor cells.
Authors: Zhang, Kun and Li, Bin and Li, Peifang and Yang, Xiaoli and Cui, Huixian and Liu, Xiaoyun
Journal: Acta neurobiologiae experimentalis (2019): 302-308
Super blinking and biocompatible nanoprobes based on dye doped BSA nanoparticles for super resolution imaging.
Authors: Zong, Shenfei and Pan, Fengmei and Zhang, Ruohu and Chen, Chen and Wang, Zhuyuan and Cui, Yiping
Journal: Nanotechnology (2019): 065701
[Sepsis impairs aggregation of nicotinic acetylcholine receptors on murine skeletal muscle cell membranes by inhibiting AKT/GSK3β phosphorylation].
Authors: Li, Tianmei and Liu, Li and Wang, Xiaobin
Journal: Nan fang yi ke da xue xue bao = Journal of Southern Medical University (2019): 1337-1343
上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
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货号 | 21091 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 10×50 ug | 价格 | 2604 | |
| Ex (nm) | 495 | Em (nm) | 516 | |
| 分子量 | 1074.98 | 溶剂 | DMSO | |
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
钙离子荧光探针Fluo-8H, AM是美国AAT Bioquest生产的用于标记钙离子的荧光探针，钙的测量对于许多生物学研究至关重要。荧光探针显示结合Ca2+后的光谱响应，使研究人员能够通过荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。Fluo-3和Fluo-4最常用于可见光可兴奋的钙指示剂中。然而，Fluo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后仅在活细胞中发生中度荧光，并且需要苛刻的细胞负载条件以最大化其细胞钙响应。Fluo-8®染料的开发是为了改善细胞负载和钙响应，同时保持方便的Fluo-3和Fluo-4光谱波长，最大激发波长为~490 nm，最大发射波长为~520 nm。Fluo-8®AM仅需要室温，而Fluo-3 AM和Fluo-4 AM需要37℃的细胞负载。此外，Fluo-8®比Fluo-4 AM亮2倍，比Fluo-3 AM亮4倍。AAT Bioquest提供一系列具有不同钙结合亲和力的优异Fluo-8®试剂（Fluo-8®：Kd = 389 nM; Fluo-8H：Kd = 232 nM; Fluo-8L：Kd =1.86μM; Fluo-8FF ：Kd =10μM）。我们还提供多种包装尺寸，以满足您的特殊需求，例如1毫克; 10×50μg; 20×50μg; HTS包装，无需额外包装费用。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针。
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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针
适用仪器
| 荧光显微镜 | |
| 激发： | FITC |
| 发射： | FITC |
| 推荐孔板： | 黑色透明 |
| 荧光酶标仪 | |
| 激发： | 490nm |
| 发射： | 525nm |
| cutoff: | 515nm |
| 推荐孔板： | 黑色透明 |
| 读取模式： | 底读模式 |
产品说明书
操作步骤
1.准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。
2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Fluo-8H，AM原液。
2.1使用的Fluo-8H，AM的量：1毫克
2.2所需浓度：2 mM
2.3在合适的容器中，将1mg Fluo-8H TM，AM与465.12μL无水DMSO混合。
3.使用10μMFluo-8H ，AM 4在HHBS中制备2X工作溶液，0.08％Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
3.1最终孔内浓度为Fluo-8H ，AM：5μM
3.2Pluronic®F-127的最终井内浓度：0.04％
3.3最终孔内浓度的丙磺舒：1mM
3.4在合适的容器中混合16μLFluo-8H TM，AM，25.6μL10％Pluronic F-127和256μL25mM丙磺舒。然后，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。
注意：对于大多数细胞系，我们建议使用Fluo-8H™的最终浓度，AM为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127井浓度最终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的最终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的最终浓度调节至以下：5μMFluo-8H ，AM，0.04％Pluronic F-127,1mM丙磺舒。
5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-120分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL。
7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。
8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 494/517 nm运行实验。
试剂应用文献
AMPA receptors in the synapse turnover by monomer diffusion
Authors: Morise, Jyoji and Suzuki, Kenichi GN and Kitagawa, Ayaka and Wakazono, Yoshihiko and Takamiya, Kogo and Tsunoyama, Taka A and Nemoto, Yuri L and Takematsu, Hiromu and Kusumi, Akihiro and Oka, Shogo
Journal: Nature communications (2019): 1–18
Cryo-EM Studies of TMEM16F Calcium-Activated Ion Channel Suggest Features Important for Lipid Scrambling
Authors: Feng, Shengjie and Dang, Shangyu and Han, Tina Wei and Ye, Wenlei and Jin, Peng and Cheng, Tong and Li, Junrui and Jan, Yuh Nung and Jan, Lily Yeh and Cheng, Yifan
Journal: Cell Reports (2019): 567–579
Discrimination of Dormant and Active Hematopoietic Stem Cells by G0 Marker Reveals Dormancy Regulation by Cytoplasmic Calcium
Authors: Fukushima, Tsuyoshi and Tanaka, Yosuke and Hamey, Fiona K and Chang, Chih-Hsiang and Oki, Toshihiko and Asada, Shuhei and Hayashi, Yasutaka and Fujino, Takeshi and Yonezawa, Taishi and Takeda, Reina and others
Journal: Cell Reports (2019): 4144–4158
Ketamine Increases Proliferation of Human iPSC-Derived Neuronal Progenitor Cells via Insulin-Like Growth Factor 2 and Independent of the NMDA Receptor
Authors: Grossert, Aless and ra and Mehrjardi, Narges Zare and Bailey, Sarah J and Lindsay, Mark A and Hescheler, Jürgen and Saric, Tomo and Teusch, Nicole
Journal: Cells (2019): 1139
MRGPRX4 is a bile acid receptor for human cholestatic itch
Authors: Yu, Huasheng and Zhao, Tianjun and Liu, Simin and Wu, Qinxue and Johnson, Omar and Wu, Zhaofa and Zhuang, Zihao and Shi, Yaocheng and Peng, Luxin and He, Renxi and others
Journal: eLife (2019): e48431
P2Y6 signaling in alveolar macrophages prevents leukotriene-dependent type 2 allergic lung inflammation
Authors: Nagai, Jun and Balestrieri, Barbara and Fanning, Laura B and Kyin, Timothy and Cirka, Haley and Lin, Junrui and Idzko, Marco and Zech, Andreas and Kim, Edy Y and Brennan, Patrick J and others
Journal: The Journal of clinical investigation (2019)
Hyperglycaemia disrupts conducted vasodilation in the resistance vasculature of db/db mice
Authors: Lemmey, Hamish AL and Ye, Xi and Ding, Hong C and Triggle, Christopher R and Garland, Christopher J and Dora, Kim A
Journal: Vascular pharmacology (2018): 29–35
Methionine and valine activate the mammalian target of rapamycin complex 1 pathway through heterodimeric amino acid taste receptor (TAS1R1/TAS1R3) and intracellular Ca2+ in bovine mammary epithelial cells
Authors: Zhou, Y and Zhou, Z and Peng, J and Loor, Juan J
Journal: Journal of dairy science (2018): 11354–11363
TRPA1-dependent reversible opening of tight junction by natural compounds with an $alpha$, $beta$-unsaturated moiety and capsaicin
Authors: Kanda, Yusuke and Yamasaki, Youhei and Sasaki-Yamaguchi, Yoshie and Ida-Koga, Noriko and Kamisuki, Shinji and Sugawara, Fumio and Nagumo, Yoko and Usui, Takeo
Journal: Scientific reports (2018): 1–13
A new electro-optical approach for conductance measurement: an assay for the study of drugs acting on ligand-gated ion channels
Authors: Menegon, A and Pitassi, S and Mazzocchi, N and Redaelli, L and Rizzetto, R and Roll and JF and Poli, C and Imberti, M and Lanati, A and Grohovaz, F
Journal: Scientific Reports (2017)
Altered spontaneous calcium signaling of in situ chondrocytes in human osteoarthritic cartilage
Authors: Gong, Xiaoyuan and Xie, Wenbin and Wang, Bin and Gu, Lingchuan and Wang, Fuyou and Ren, Xiang and Chen, Cheng and Yang, Liu
Journal: Scientific reports (2017): 17093
Bystander effects elicited by single-cell photo-oxidative blue-light stimulation in retinal pigment epithelium cell networks
Authors: Ishii, Masaaki and Rohrer, Bärbel
Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071
Bystander effects elicited by single-cell photo-oxidative blue-light stimulation in retinal pigment epithelium cell networks
Authors: Ishii, Masaaki and Rohrer, Bärbel
Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071
High-throughput screen detects calcium signaling dysfunction in typical sporadic autism spectrum disorder
Authors: Schmunk, Galina and Nguyen, Rachel L and Ferguson, David L and Kumar, Kenny and Parker, Ian and Gargus, J Jay
Journal: Scientific Reports (2017): 40740
参考文献
Passive and parallel microfluidic formation of droplet interface bilayers (DIBs) for measurement of leakage of small molecules through artificial phospholipid membranes
Authors: Magdalena A Czekalska, Tomasz S Kaminski, Karol Makuch, Piotr Garstecki
Journal: Sensors and Actuators B: Chemical (2019)
Development of micro mechanical device having two-dimensional array of micro chambers for cell stretching
Authors: K Minami, T Hayashi, K Sato, T Nakahara
Journal: Biomedical microdevices (2018): 10
Spatiotemporal magnetic fields enhance cytosolic Ca 2+ levels and induce actin polymerization via activation of voltage-gated sodium channels in skeletal muscle cells
Authors: Mónica Rubio Ayala, Tatiana Syrovets, Susanne Hafner, Vitalii Zablotskii, Alexandr Dejneka, Thomas Simmet
Journal: Biomaterials (2018)
2-OMe-lysophosphatidylcholine analogues are GPR119 ligands and activate insulin secretion from βTC-3 pancreatic cells: Evaluation of structure-dependent biological activity
Authors: Anna Drzazga, Agata Sowińska, Agnieszka Krzemińska, Andrzej Okruszek, Piotr Paneth, Maria Koziolkiewicz, Edyta Gendaszewska-Darmach
Journal: Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular and Cell Biology of Lipids (2017)
A new electro-optical approach for conductance measurement: an assay for the study of drugs acting on ligand-gated ion channels
Authors: A Menegon, S Pitassi, N Mazzocchi, L Redaelli, R Rizzetto, JF Rolland, C Poli, M Imberti, A Lanati, F Grohovaz
Journal: Scientific Reports (2017)
Altered spontaneous calcium signaling of in situ chondrocytes in human osteoarthritic cartilage
Authors: Xiaoyuan Gong, Wenbin Xie, Bin Wang, Lingchuan Gu, Fuyou Wang, Xiang Ren, Cheng Chen, Liu Yang
Journal: Scientific reports (2017): 17093
Analysis of Ca2+ response of osteocyte network by three-dimensional time-lapse imaging in living bone
Authors: Tomoyo Tanaka, Mitsuhiro Hoshijima, Junko Sunaga, Takashi Nishida, Mana Hashimoto, Naoya Odagaki, Ryuta Osumi, Taiji Aadachi, Hiroshi Kamioka
Journal: Journal of Bone and Mineral Metabolism (2017): 1–10
Aryl-and alkyl-phosphorus-containing flame retardants induced mitochondrial impairment and cell death in Chinese hamster ovary (CHO-k1) cells
Authors: Chao Huang, Na Li, Shengwu Yuan, Xiaoya Ji, Mei Ma, Kaifeng Rao, Zijian Wang
Journal: Environmental Pollution (2017): 775–786
Bystander effects elicited by single-cell photo-oxidative blue-light stimulation in retinal pigment epithelium cell networks
Authors: Masaaki Ishii, Bärbel Rohrer
Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071
Ca 2+ signals initiate at immobile IP 3 receptors adjacent to ER-plasma membrane junctions
Authors: Nagendra Babu Thillaiappan, Alap P Chavda, Stephen C Tovey, David L Prole, Colin W Taylor
Journal: Nature Communications (2017): 1505
相关产品
| 产品名称 | 货号 |
| 钙离子荧光探针Cal-520 , AM | Cat#21130 |
| 钙离子荧光探针Fluo-8, AM | Cat#21080 |
| 新型钙离子荧光探针Calbryte 520, AM *细胞渗透性* | Cat#20650 |
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| 货号 | 21095 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 10×50 ug | 价格 | 2604 |
| Ex (nm) | 495 | Em (nm) | 516 |
| 分子量 | 802.60 | 溶剂 | Water |
| 产品详细介绍 | |||
简要概述
钙离子荧光探针Fluo-8H, 钠盐是美国AAT Bioquest生产的用于标记钙离子的荧光探针，钙的测量对于许多生物学研究至关重要。荧光探针显示结合Ca2+后的光谱响应，使研究人员能够通过荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。Fluo-3和Fluo-4最常用于可见光可兴奋的钙指示剂中。然而，Fluo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后仅在活细胞中发生中度荧光，并且需要苛刻的细胞负载条件以最大化其细胞钙响应。Fluo-8®染料的开发是为了改善细胞负载和钙响应，同时保持方便的Fluo-3和Fluo-4光谱波长，最大激发波长为~490 nm，最大发射波长为~520 nm。Fluo-8®AM仅需要室温，而Fluo-3 AM和Fluo-4 AM需要37℃的细胞负载。此外，Fluo-8®比Fluo-4 AM亮2倍，比Fluo-3 AM亮4倍。AAT Bioquest提供一系列具有不同钙结合亲和力的优异Fluo-8®试剂（Fluo-8®：Kd = 389 nM; Fluo-8H：Kd = 232 nM; Fluo-8L：Kd =1.86μM; Fluo-8FF ：Kd =10μM）。我们还提供多种包装尺寸，以满足您的特殊需求，例如1毫克; 10×50μg; 20×50μg; HTS包装，无需额外包装费用。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针。
点击查看光谱
钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针
产品说明书
使用Fluo-8®AM酯类
1.使用Fluo-8®AM酯：
AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。
以下是我们推荐的将Fluo-8®AM酯加入活细胞的方案。该协议仅提供指南，应根据您的具体需求进行修改。
a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Fluo-8®AM酯原液。
b）在实验当天，将Fluo-8® 溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或0.02％Pluronic®F-127的缓冲液中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系，建议使用浓度范围为4-5 uM的Fluo-8®试剂。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的最小染料浓度。
注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Fluo-8®AM 酯的水溶性。
c）如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可以在细胞培养基中加入丙磺舒（1-2.5 mM）或磺吡酮（0.1-0.25 mM），以减少脱酯化指标的渗漏。
d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。
e）在细胞培养箱中孵育或染料装载板室温下为20分钟至一小时。
f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如2.5 mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。
g）运行用Ex / Em比值=490/525纳米
使用Screen Quest Fluo-8 NW钙测定试剂盒进行HTS应用
可以通过直接测量受体介导的cAMP积累或细胞内Ca2+浓度的变化来检测GPCR活化。通过Gq偶联的GPCR靶标产生细胞内Ca2+的增加可以使用Fluo-8®试剂和荧光酶标仪的组合进行测量。荧光成像板读取器（例如，FLIPR，FDSS或BMG NovoStar）具有冷却的CCD相机成像系统，其同时收集来自微孔板（96孔和384孔）的每个孔的信号。这些读板器可以以亚秒的间隔读取，这使得能够捕获响应的动力学，并且具有可以被编程用于连续液体添加的集成移液器。除了对GPCR靶标的强大应用外，我们的Screen Quest Fluo-8钙测定试剂盒还可用于表征钙离子通道和筛选钙离子通道靶向化合物。
图1.使用Screen Quest Fluo-8 NW测定试剂盒和Fluo-4 NW测定试剂盒在HEK-293细胞中测量卡巴胆碱剂量反应。 将HEK-293细胞以40,000个细胞/100μL/孔接种过夜，置于96孔黑色壁/透明底板中。除去生长培养基，并将细胞分别与100μL的Screen Quest Fluo 8-NW钙测定试剂盒和Fluo-4 NW试剂盒（根据制造商的说明书）在室温下温育1小时。通过NOVOstar（BMG LabTech）添加卡巴胆碱（25μL/孔）以达到最终指示的浓度。Fluo-8 NW 的EC 50约为1.2 uM。
与基于Fluo-3或Fluo-4的其他商业钙测定试剂盒相比，我们的Screen Quest 钙测定试剂盒具有以下HTS应用优势：
使用Fluo-8® 盐
钙校准可以通过测量具有精确已知的游离Ca 2+浓度的溶液中的指示剂的盐形式（荧光酶标仪中25至50μM）的荧光强度来进行。可以基于30mM MOPS EGTA Ca 2+缓冲液使用校准溶液。通常，水含有微量的钙离子。强烈建议使用30 mM MOPS + 100 mM KCl，pH 7.2作为缓冲系统。可以简单地制备如下所列的0和39μM钙原液，这两种溶液用于制备不同Ca 2+浓度的连续溶液
A.0μM钙：30mM MOPS + 100mM KCl，pH 7.2缓冲液+ 10mM EGTA
B.39μM钙：30mM MOPS + 100mM KCl，pH 7.2缓冲液+ 10mM EGTA + 10mM CaCl 2
为了确定溶液的游离钙浓度或 单波长钙指示剂的K d，使用以下等式：
的[Ca] 游离 = K d [F─˚F 分钟 ] / F 最大 ─F]
其中F是特定实验钙水平下指示剂的荧光强度，F min是不存在钙时的荧光强度，F max是钙饱和探针的荧光强度。
解离常数（K d）是探针对钙的亲和力的量度。与校准溶液相比，荧光指示剂的钙结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的K d值。通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca 2+缓冲液来进行原位校准。或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或Triton®X-100可用于将指示剂暴露于受控Ca.2+水平的细胞外培养基。
试剂应用文献
AMPA receptors in the synapse turnover by monomer diffusion
Authors: Morise, Jyoji and Suzuki, Kenichi GN and Kitagawa, Ayaka and Wakazono, Yoshihiko and Takamiya, Kogo and Tsunoyama, Taka A and Nemoto, Yuri L and Takematsu, Hiromu and Kusumi, Akihiro and Oka, Shogo
Journal: Nature communications (2019): 1–18
Cryo-EM Studies of TMEM16F Calcium-Activated Ion Channel Suggest Features Important for Lipid Scrambling
Authors: Feng, Shengjie and Dang, Shangyu and Han, Tina Wei and Ye, Wenlei and Jin, Peng and Cheng, Tong and Li, Junrui and Jan, Yuh Nung and Jan, Lily Yeh and Cheng, Yifan
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Authors: Fukushima, Tsuyoshi and Tanaka, Yosuke and Hamey, Fiona K and Chang, Chih-Hsiang and Oki, Toshihiko and Asada, Shuhei and Hayashi, Yasutaka and Fujino, Takeshi and Yonezawa, Taishi and Takeda, Reina and others
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Ketamine Increases Proliferation of Human iPSC-Derived Neuronal Progenitor Cells via Insulin-Like Growth Factor 2 and Independent of the NMDA Receptor
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Journal: eLife (2019): e48431
P2Y6 signaling in alveolar macrophages prevents leukotriene-dependent type 2 allergic lung inflammation
Authors: Nagai, Jun and Balestrieri, Barbara and Fanning, Laura B and Kyin, Timothy and Cirka, Haley and Lin, Junrui and Idzko, Marco and Zech, Andreas and Kim, Edy Y and Brennan, Patrick J and others
Journal: The Journal of clinical investigation (2019)
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Journal: Scientific reports (2018): 1–13
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Authors: Menegon, A and Pitassi, S and Mazzocchi, N and Redaelli, L and Rizzetto, R and Roll and JF and Poli, C and Imberti, M and Lanati, A and Grohovaz, F
Journal: Scientific Reports (2017)
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Authors: Gong, Xiaoyuan and Xie, Wenbin and Wang, Bin and Gu, Lingchuan and Wang, Fuyou and Ren, Xiang and Chen, Cheng and Yang, Liu
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Bystander effects elicited by single-cell photo-oxidative blue-light stimulation in retinal pigment epithelium cell networks
Authors: Ishii, Masaaki and Rohrer, Bärbel
Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071
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Authors: Schmunk, Galina and Nguyen, Rachel L and Ferguson, David L and Kumar, Kenny and Parker, Ian and Gargus, J Jay
Journal: Scientific Reports (2017): 40740
参考文献
2-OMe-lysophosphatidylcholine analogues are GPR119 ligands and activate insulin secretion from βTC-3 pancreatic cells: Evaluation of structure-dependent biological activity
Authors: Anna Drzazga, Agata Sowińska, Agnieszka Krzemińska, Andrzej Okruszek, Piotr Paneth, Maria Koziolkiewicz, Edyta Gendaszewska-Darmach
Journal: Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular and Cell Biology of Lipids (2017)
A new electro-optical approach for conductance measurement: an assay for the study of drugs acting on ligand-gated ion channels
Authors: A Menegon, S Pitassi, N Mazzocchi, L Redaelli, R Rizzetto, JF Rolland, C Poli, M Imberti, A Lanati, F Grohovaz
Journal: Scientific Reports (2017)
Altered spontaneous calcium signaling of in situ chondrocytes in human osteoarthritic cartilage
Authors: Xiaoyuan Gong, Wenbin Xie, Bin Wang, Lingchuan Gu, Fuyou Wang, Xiang Ren, Cheng Chen, Liu Yang
Journal: Scientific reports (2017): 17093
Analysis of Ca2+ response of osteocyte network by three-dimensional time-lapse imaging in living bone
Authors: Tomoyo Tanaka, Mitsuhiro Hoshijima, Junko Sunaga, Takashi Nishida, Mana Hashimoto, Naoya Odagaki, Ryuta Osumi, Taiji Aadachi, Hiroshi Kamioka
Journal: Journal of Bone and Mineral Metabolism (2017): 1–10
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Authors: Chao Huang, Na Li, Shengwu Yuan, Xiaoya Ji, Mei Ma, Kaifeng Rao, Zijian Wang
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Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071
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Authors: Nagendra Babu Thillaiappan, Alap P Chavda, Stephen C Tovey, David L Prole, Colin W Taylor
Journal: Nature Communications (2017): 1505
Cells smell on a CMOS: A portable odorant detection system using cell-laden collagen pillars
Authors: Yusuke Hirata, Yuya Morimoto, Eunryel Nam, Shotaro Yoshida, Shoji Takeuchi
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Ex vivo replication of phenotypic functions of osteocytes through biomimetic 3D bone tissue construction
Authors: Qiaoling Sun, Saba Choudhary, Ciaran Mannion, Yair Kissin, Jenny Zilberberg, Woo Y Lee
Journal: Bone (2017)
High Glucose Enhances Isoflurane-Induced Neurotoxicity by Regulating TRPC-Dependent Calcium Influx
Authors: ZhongJie Liu, ChangQing Ma, Wei Zhao, QingGuo Zhang, Rui Xu, HongFei Zhang, HongYi Lei, ShiYuan Xu
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| 规格 | 1 mg | 价格 | 3924 | |
| Ex (nm) | 495 | Em (nm) | 516 | |
| 分子量 | 1078.95 | 溶剂 | DMSO | |
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
产品基本信息
货号：21096
产品名称：钙离子荧光探针Fluo-8L, AM
规格：1mg
储存条件：-15℃避光防潮
保质期：24个月
产品物理化学光谱特性
分子量：1078.95
溶剂：DMSO
激发波长(nm)：494
发射波长(nm)：517
适用仪器
| 荧光显微镜 | |
| 激发： | FITC |
| 发射： | FITC |
| 推荐孔板： | 黑色透明 |
| 荧光酶标仪 | |
| 激发： | 490nm |
| 发射： | 525nm |
| cutoff: | 515nm |
| 推荐孔板： | 黑色透明 |
| 读取模式： | 底读模式 |
产品介绍
钙离子荧光探针Fluo-8L, AM 是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2 +后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2 +浓度的变化。在可见光激发钙指示剂中，Fluo-3和Fluo-4最常用。但是，Fluo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后在活细胞中仅适度发荧光，并且需要苛刻的细胞加载条件才能最大化其细胞钙反应。开发Fluo-8®染料可改善细胞负载和钙响应，同时保持便捷的Fluo-3和Fluo-4光谱波长（在〜490 nm处具有最大激发和在〜520 nm处具有最大发射）。Fluo-8®AM仅需要室温，而Fluo-3 AM和Fluo-4 AM需要37℃的细胞负载。此外，Fluo-8®的亮度是Fluo-4 AM的2倍，是Fluo-3 AM的4倍。AAT Bioquest提供了一套我们的出色Fluo-8®试剂，具有不同的钙结合亲和力（Fluo-8®：Kd = 389 nM； Fluo-8H：Kd = 232 nM； Fluo-8L：Kd = 1.86 µM； Fluo-8FF ：Kd = 10 µM）。我们还提供多种包装尺寸以满足您的特殊需求，例如1毫克；10×50 µg；20×50 µg；HTS包装，不收取额外包装费用。Kd = 232 nM；Fluo-8L：Kd = 1.86 µM；Fluo-8FF：Kd = 10 µM）。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针Fluo-8L, AM 。
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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针
试剂应用文献
AMPA receptors in the synapse turnover by monomer diffusion
Authors: Morise, Jyoji and Suzuki, Kenichi GN and Kitagawa, Ayaka and Wakazono, Yoshihiko and Takamiya, Kogo and Tsunoyama, Taka A and Nemoto, Yuri L and Takematsu, Hiromu and Kusumi, Akihiro and Oka, Shogo
Journal: Nature communications (2019): 1–18
Cryo-EM Studies of TMEM16F Calcium-Activated Ion Channel Suggest Features Important for Lipid Scrambling
Authors: Feng, Shengjie and Dang, Shangyu and Han, Tina Wei and Ye, Wenlei and Jin, Peng and Cheng, Tong and Li, Junrui and Jan, Yuh Nung and Jan, Lily Yeh and Cheng, Yifan
Journal: Cell Reports (2019): 567–579
Discrimination of Dormant and Active Hematopoietic Stem Cells by G0 Marker Reveals Dormancy Regulation by Cytoplasmic Calcium
Authors: Fukushima, Tsuyoshi and Tanaka, Yosuke and Hamey, Fiona K and Chang, Chih-Hsiang and Oki, Toshihiko and Asada, Shuhei and Hayashi, Yasutaka and Fujino, Takeshi and Yonezawa, Taishi and Takeda, Reina and others
Journal: Cell Reports (2019): 4144–4158
Ketamine Increases Proliferation of Human iPSC-Derived Neuronal Progenitor Cells via Insulin-Like Growth Factor 2 and Independent of the NMDA Receptor
Authors: Grossert, Aless and ra and Mehrjardi, Narges Zare and Bailey, Sarah J and Lindsay, Mark A and Hescheler, Jürgen and Saric, Tomo and Teusch, Nicole
Journal: Cells (2019): 1139
MRGPRX4 is a bile acid receptor for human cholestatic itch
Authors: Yu, Huasheng and Zhao, Tianjun and Liu, Simin and Wu, Qinxue and Johnson, Omar and Wu, Zhaofa and Zhuang, Zihao and Shi, Yaocheng and Peng, Luxin and He, Renxi and others
Journal: eLife (2019): e48431
P2Y6 signaling in alveolar macrophages prevents leukotriene-dependent type 2 allergic lung inflammation
Authors: Nagai, Jun and Balestrieri, Barbara and Fanning, Laura B and Kyin, Timothy and Cirka, Haley and Lin, Junrui and Idzko, Marco and Zech, Andreas and Kim, Edy Y and Brennan, Patrick J and others
Journal: The Journal of clinical investigation (2019)
Hyperglycaemia disrupts conducted vasodilation in the resistance vasculature of db/db mice
Authors: Lemmey, Hamish AL and Ye, Xi and Ding, Hong C and Triggle, Christopher R and Garland, Christopher J and Dora, Kim A
Journal: Vascular pharmacology (2018): 29–35
Methionine and valine activate the mammalian target of rapamycin complex 1 pathway through heterodimeric amino acid taste receptor (TAS1R1/TAS1R3) and intracellular Ca2+ in bovine mammary epithelial cells
Authors: Zhou, Y and Zhou, Z and Peng, J and Loor, Juan J
Journal: Journal of dairy science (2018): 11354–11363
TRPA1-dependent reversible opening of tight junction by natural compounds with an $alpha$, $beta$-unsaturated moiety and capsaicin
Authors: Kanda, Yusuke and Yamasaki, Youhei and Sasaki-Yamaguchi, Yoshie and Ida-Koga, Noriko and Kamisuki, Shinji and Sugawara, Fumio and Nagumo, Yoko and Usui, Takeo
Journal: Scientific reports (2018): 1–13
A new electro-optical approach for conductance measurement: an assay for the study of drugs acting on ligand-gated ion channels
Authors: Menegon, A and Pitassi, S and Mazzocchi, N and Redaelli, L and Rizzetto, R and Roll and JF and Poli, C and Imberti, M and Lanati, A and Grohovaz, F
Journal: Scientific Reports (2017)
Altered spontaneous calcium signaling of in situ chondrocytes in human osteoarthritic cartilage
Authors: Gong, Xiaoyuan and Xie, Wenbin and Wang, Bin and Gu, Lingchuan and Wang, Fuyou and Ren, Xiang and Chen, Cheng and Yang, Liu
Journal: Scientific reports (2017): 17093
Bystander effects elicited by single-cell photo-oxidative blue-light stimulation in retinal pigment epithelium cell networks
Authors: Ishii, Masaaki and Rohrer, Bärbel
Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071
Bystander effects elicited by single-cell photo-oxidative blue-light stimulation in retinal pigment epithelium cell networks
Authors: Ishii, Masaaki and Rohrer, Bärbel
Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071
High-throughput screen detects calcium signaling dysfunction in typical sporadic autism spectrum disorder
Authors: Schmunk, Galina and Nguyen, Rachel L and Ferguson, David L and Kumar, Kenny and Parker, Ian and Gargus, J Jay
Journal: Scientific Reports (2017): 40740
参考文献
2-OMe-lysophosphatidylcholine analogues are GPR119 ligands and activate insulin secretion from βTC-3 pancreatic cells: Evaluation of structure-dependent biological activity
Authors: Anna Drzazga, Agata Sowińska, Agnieszka Krzemińska, Andrzej Okruszek, Piotr Paneth, Maria Koziolkiewicz, Edyta Gendaszewska-Darmach
Journal: Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular and Cell Biology of Lipids (2017)
A new electro-optical approach for conductance measurement: an assay for the study of drugs acting on ligand-gated ion channels
Authors: A Menegon, S Pitassi, N Mazzocchi, L Redaelli, R Rizzetto, JF Rolland, C Poli, M Imberti, A Lanati, F Grohovaz
Journal: Scientific Reports (2017)
Altered spontaneous calcium signaling of in situ chondrocytes in human osteoarthritic cartilage
Authors: Xiaoyuan Gong, Wenbin Xie, Bin Wang, Lingchuan Gu, Fuyou Wang, Xiang Ren, Cheng Chen, Liu Yang
Journal: Scientific reports (2017): 17093
Analysis of Ca2+ response of osteocyte network by three-dimensional time-lapse imaging in living bone
Authors: Tomoyo Tanaka, Mitsuhiro Hoshijima, Junko Sunaga, Takashi Nishida, Mana Hashimoto, Naoya Odagaki, Ryuta Osumi, Taiji Aadachi, Hiroshi Kamioka
Journal: Journal of Bone and Mineral Metabolism (2017): 1–10
Aryl-and alkyl-phosphorus-containing flame retardants induced mitochondrial impairment and cell death in Chinese hamster ovary (CHO-k1) cells
Authors: Chao Huang, Na Li, Shengwu Yuan, Xiaoya Ji, Mei Ma, Kaifeng Rao, Zijian Wang
Journal: Environmental Pollution (2017): 775–786
Bystander effects elicited by single-cell photo-oxidative blue-light stimulation in retinal pigment epithelium cell networks
Authors: Masaaki Ishii, Bärbel Rohrer
Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071
Ca 2+ signals initiate at immobile IP 3 receptors adjacent to ER-plasma membrane junctions
Authors: Nagendra Babu Thillaiappan, Alap P Chavda, Stephen C Tovey, David L Prole, Colin W Taylor
Journal: Nature Communications (2017): 1505
Cells smell on a CMOS: A portable odorant detection system using cell-laden collagen pillars
Authors: Yusuke Hirata, Yuya Morimoto, Eunryel Nam, Shotaro Yoshida, Shoji Takeuchi
Journal: (2017): 13–16
Ex vivo replication of phenotypic functions of osteocytes through biomimetic 3D bone tissue construction
Authors: Qiaoling Sun, Saba Choudhary, Ciaran Mannion, Yair Kissin, Jenny Zilberberg, Woo Y Lee
Journal: Bone (2017)
High Glucose Enhances Isoflurane-Induced Neurotoxicity by Regulating TRPC-Dependent Calcium Influx
Authors: ZhongJie Liu, ChangQing Ma, Wei Zhao, QingGuo Zhang, Rui Xu, HongFei Zhang, HongYi Lei, ShiYuan Xu
Journal: Neurochemical Research (2017): 1–14
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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
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货号 | 11109 | 存储条件 | 在2-8度冷藏保存 |
| 规格 | 100 Tests | 价格 | 1008 | |
| Ex (nm) | 485 | Em (nm) | 590 | |
| 分子量 | 溶剂 | |||
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
Portelite 荧光蛋白定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于定量蛋白的试剂盒，蛋白质定量是蛋白质纯化，电泳，细胞生物学，分子生物学和其他研究应用中的重要组成部分。 Biuret，Lowry，BCA和Bradford检测常规用于估计蛋白质浓度。然而，这些比色测定不太敏感，并且需要大的样品体积以确保准确性。我们的Portelite 荧光蛋白定量试剂盒比现有的比色蛋白测定法（例如Bradford和Bicinchoninic acid（BCA）测定法）更敏感。试剂盒中使用的Prolite 橙在水溶液中是非荧光的，但与蛋白质反应迅速并产生明亮的荧光。 Portelite 荧光蛋白定量试剂盒提供了一种简单的方法来定量溶液中的蛋白质浓度。该测定的动态范围为12.5ug / mL至5mg / mL的BSA。该套件针对Cytocite 和Qubit 荧光分析仪进行了优化。它可用于（1）研究蛋白质/蛋白质相互作用; （2）亲和层析后测定柱级分; （3）估计细胞提取物中膜蛋白的回收率; （4）融合蛋白的高通量筛选。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Portelite 荧光蛋白定量试剂盒。
适用仪器
| Qubit 荧光计 | |
| 激发： | 480nm |
| 发射： | 510-580nm |
| 器材： | 0.2 mL薄壁PCR管 |
| CytoCite 荧光计 | |
| 激发： | 480nm |
| 发射： | 510-580nm |
| 器材： | 0.2 mL薄壁PCR管 |
产品说明书
操作步骤
简要概述
准备并添加BSA标准品或测试样品（10μL）
在0.2 mL PCR管（Cat＃CCT100）中制备并添加Prolite 橙色工作溶液（190μL）
在室温下孵育15分钟
使用CytoCite 或Qubit荧光分析仪监测荧光
溶液制备
Prolite 橙色工作溶液：
将5μLProlite Orange（200X）（组分A）加入995μL样品稀释缓冲液（组分E）中并充分混合。 注意：请勿将工作溶液混入玻璃容器中。
样品实验方案
该方案适用于Qubit®荧光分析仪。
1.运行蛋白质测定
1.1每孔加入190μL/孔的Prolite Orange工作溶液。
1.2将10μLBSA标准品（组分B，C，D）或10μL样品加入190μLProlite Orange工作溶液管中，使最终测定体积为200μL/管。
1.3在室温下孵育反应15分钟。 注意：保护样品避光，避免将样品拿在手中。
1.4将样品插入CytoCite 并用绿色荧光通道监测荧光。 按照适用于CytoCite 荧光计的步骤进行操作。具体操作点击查看。
2.Qubit®荧光计的简要方案
2.1按Qubit®主屏幕主屏幕上的蛋白质，然后按读取标准。
2.2将3个含有标准的试管中的每一个插入样品室。
2.3关闭盖子并按Read标准。
2.4仪器显示结果并生成校准曲线。
2.5按Run sample并选择样品量至10μL。
2.6将样品管插入样品室。
2.7盖上盖子，然后按Read tube。
2.8仪器在实验屏幕上显示结果。 最高值是原始样品浓度，最低值是稀释浓度。
3.标准溶液制备
对于CytoCite 荧光计测定，您可以选择使用自己的蛋白质标准进行校准。这是一个生成定制蛋白质标准曲线的简要方案。
3.1在PBS缓冲液中制备400μg/ ml（400 ng /μL）的蛋白质溶液。
3.2用PBS缓冲液进行1：2连续稀释，得到200,100,50,25,12.5ng /μl系列标准稀释液。
3.3将190μLPolite 橙色工作溶液加入0.2 mL PCR管中。
3.4每管加入10μL标准品或10μL样品。
3.5在室温下孵育反应15分钟。
3.6将样品插入CytoCite 并用绿色荧光通道监测荧光。
图示
图1使用Portelite 荧光蛋白定量试剂盒*优化用于CytoCite 和Qubit 荧光分析仪*和Qubit®荧光分析仪，在Ex / Em 485 / 5000nm下测量BSA，鸡蛋卵清蛋白，猪甲状腺球蛋白的系列稀释液。 可以检测到低至50 ng / mL的蛋白质。
参考文献
Dual Amplification Fluorescence Assay for Alpha Fetal Protein Utilizing Immunohybridization Chain Reaction and Metal-Enhanced Fluorescence of Carbon Nanodots
Authors: Xu, D. D.; Liu, C.; Li, C. Y.; Song, C. Y.; Kang, Y. F.; Qi, C. B.; Lin, Y.; Pang, D. W.; Tang, H. W.
Journal: ACS Appl Mater Interfaces (2017): 37606-37614
Quantification of Membrane Protein Self-Association with a High-Throughput Compatible Fluorescence Assay
Authors: Li, J.; Qiu, X. J.
Journal: Biochemistry (2017): 1951-1954
Use of anchor protein modules in fluorescence polarisation aptamer assay for ochratoxin A determination
Authors: Samokhvalov, A. V.; Safenkova, I. V.; Eremin, S. A.; Zherdev, A. V.; Dzantiev, B. B.
Journal: Anal Chim Acta (2017): 80-87
Tryptophan fluorescence quenching as a binding assay to monitor protein conformation changes in the membrane of intact mitochondria
Authors: Akbar, S. M.; Sreeramulu, K.; Sharma, H. C.
Journal: J Bioenerg Biomembr (2016): 241-7
Ag@SiO2-entrapped hydrogel microarray: a new platform for a metal-enhanced fluorescence-based protein assay
Authors: Jang, E.; Kim, M.; Koh, W. G.
Journal: Analyst (2015): 3375-83
Label-free fluorescence assay for protein kinase based on peptide biomineralized gold nanoclusters as signal sensing probe
Authors: Song, W.; Wang, Y.; Liang, R. P.; Zhang, L.; Qiu, J. D.
Journal: Biosens Bioelectron (2015): 234-40
Budded baculoviruses as a tool for a homogeneous fluorescence anisotropy-based assay of ligand binding to G protein-coupled receptors: the case of melanocortin 4 receptors
Authors: Veiksina, S.; Kopanchuk, S.; Rinken, A.
Journal: Biochim Biophys Acta (2014): 372-81
Characterization of G protein-coupled receptors by a fluorescence-based calcium mobilization assay
Authors: Caers, J.; Peymen, K.; Suetens, N.; Temmerman, L.; Janssen, T.; Schoofs, L.; Beets, I.
Journal: J Vis Exp (2014): e51516
Cleavage of pro-tumor necrosis factor alpha by ADAM metallopeptidase domain 17: a fluorescence-based protease assay cleaves its natural protein substrate
Authors: Zhang, C.; Zheng, L.; Nurnberg, J.; Vacari, B. M.; Zhou, J.; Wang, Y.
Journal: Anal Biochem (2014): 14-9
A fluorescence-based thermal shift assay identifies inhibitors of mitogen activated protein kinase kinase 4
Authors: Krishna, S. N.; Luan, C. H.; Mishra, R. K.; Xu, L.; Scheidt, K. A.; Anderson, W. F.; Bergan, R. C.
Journal: PLoS One (2013): e81504
上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
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货号 | 12516 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 5 mg | 价格 | 2604 | |
| Ex (nm) | 328 | Em (nm) | 533 | |
| 分子量 | 322.36 | 溶剂 | DMSO | |
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
产品基本信息
货号：12516
产品名称：D-荧光素醋酸
规格：5mg
储存条件：-15℃避光防潮
保质期：12个月
产品物理化学光谱特性
分子量：322.36
溶剂：DMSO
激发波长(nm)：328
发射波长(nm)：533
产品介绍
D-荧光素醋酸是美国AAT Bioquest生产的荧光染料，D-荧光素乙酯含有在羧基位置连接的甲基部分，因此防止它被萤火虫荧光素酶识别。 然而，酯通过脂肪酶活性有效地水解，并且所得的D-荧光素被荧光素酶很好地识别。 D-荧光素甲酯是用于在均相测定中或在与荧光素酶及其辅因子组合的细胞裂解物样品中化学发光测量脂肪酶活性的敏感底物。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的D-荧光素醋酸。
金畔问号：荧光素酶到底该如何检测？
参考文献
C3-Luc Cells Are an Excellent Model for Evaluation of Cellular Immunity following HPV16L1 Vaccination
Authors: Li-Li Li, He-Rong Wang, Zhi-Yi Zhou, Jing Luo, Xiao-Li Wang, Xiang-Qian Xiao, Yu-Bai Zhou, Yi Zeng
Journal: PloS one (2016): e0149748
Genome-wide microRNA analysis identifies miR-188-3p as novel prognostic marker and molecular factor involved in colorectal carcinogenesis
Authors: Martin Pichler, Verena Stiegelbauer, Petra Vychytilova-Faltejskova, Cristina Ivan, Hui Ling, Elke Winter, Xinna Zhang, Matthew Goblirsch, Annika Wulf-Goldenberg, Masahisa Ohtsuka
Journal: American Association for Cancer Research (2016): clincanres–0497
Identification of a Novel Protein Kinase A Inhibitor by Bioluminescence-Based Screening
Authors: Tetsuya Ishimoto, Kenji Azechi, Hisashi Mori
Journal: Biological and Pharmaceutical Bulletin (2015): 1969–1974
Discovery of novel adenylyl cyclase inhibitor by cell-based screening
Authors: Hiroki Mano, Tetsuya Ishimoto, Takuya Okada, Naoki Toyooka, Hisashi Mori
Journal: Biological and Pharmaceutical Bulletin (2014): 1689–1693
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货号 | 20125 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 25 Tests | 价格 | 3924 | |
| Ex (nm) | 493 | Em (nm) | 517 | |
| 分子量 | 溶剂 | |||
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
我们的Cell Meter 活细胞胱天蛋白酶活性测定试剂盒基于胱天蛋白酶的荧光FMK抑制剂。 这些抑制剂是细胞可渗透的和无细胞毒性的。 一旦进入细胞，胱天蛋白酶抑制剂就与活性胱天蛋白酶共价结合。 此Cell Meter 活细胞caspase 13活性测定试剂盒旨在通过测量活细胞中的caspase 13活化来检测细胞凋亡。 它用于定量凋亡细胞中活化的caspase 13活性，或用于筛选caspase 13抑制剂。 FAM-LEED-FMK，绿色标记试剂，可通过荧光显微镜，流式细胞仪或荧光酶标仪直接检测凋亡细胞中活化的胱天蛋白酶13。 该试剂盒为所有必需成分提供了优化的测定方案。
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适用仪器
| 流式细胞仪 | |
| 激发： | 见表1 |
| 发射： | 见表1 |
| 荧光显微镜 | |
| 激发： | 见表1 |
| 发射： | 见表1 |
| 推荐孔板： | 黑色透明 |
| 荧光酶标仪 | |
| 激发： | 见表1 |
| 发射： | 见表1 |
| 通道： | 黑色透明 |
| 读取模式： | 底读模式 |
表1:参数信息
| FAM-LEED-FMK | 碘化丙啶 | hoechst 染料 | |
| 流式细胞仪 | 530/30 nm激光 (FITC 通道) | 610/20 nm激光(PE-Texas Red 通道) | 450/40 nm激光 (Pacific Blue 通道) |
| 荧光显微镜 | FITC 通道 | TRITC 通道 | DAPI 通道 |
| 荧光酶标仪 | 490/525nm | 535/635nm | 350/461nm |
产品说明书
分离细胞的检测方案
概述
用密度为5×105到2×106个细胞/ mL的测试化合物制备细胞
将FAM-YVAD-FMK以1：150的比例加入到细胞溶液中
在室温下孵育1小时
将细胞沉淀，用缓冲液或生长培养基洗涤并重悬细胞
在Ex / Em = 490 / 525nm处分析细胞
注：使用前将所有部件在室温下解冻。
操作方法
1.根据您的特异性诱导方案，将细胞培养至最适于细胞凋亡诱导的密度，但不超过2 x 106个细胞/ mL。同时，对于每种标记条件，以与诱导群体相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞群。以下是一些诱导悬浮培养细胞凋亡的例子：
1）用2μg/ ml喜树碱处理Jurkat细胞3小时。
2）用1μM星形孢菌素处理Jurkat细胞3小时。
3）用4μg/ ml喜树碱处理HL-60细胞4小时。
4）用1μM星形孢菌素处理HL-60细胞4小时。
注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。
2.通过向FAM-YVAD-FMK（组分A）的小瓶中加入50μLDMSO制备150X FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液。
3.将150×FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液（来自步骤1）以1：150的比例添加到细胞溶液中，并将细胞在37℃，5％CO 2培养箱中孵育1小时。
注1：对于FAM-YVAD-FMK标记，细胞可以浓缩至~5×10 6个细胞/ mL。 未使用的150X FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20°C。
注2：对于粘附细胞，用0.5mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在用FAM-YVAD-FMK孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。
注3：适当的孵育时间取决于所用的细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。
4.将细胞以约200g旋转5分钟，并用1mL洗涤缓冲液（组分B）洗涤细胞两次。 将细胞重悬于所需量的洗涤缓冲液中。
注1：FAM-YVAD-FMK是荧光的，因此清除任何未结合的试剂以消除背景非常重要。
注2：对于分离的细胞，应将细胞浓度调节至每个微量滴定板孔中2-5×10 5个细胞/100μL等分试样，用于步骤6。
5.如果需要，用DNA染色标记细胞（如用于死细胞的碘化丙锭，或用于细胞核染色的整个群体的Hoechst）。
6.通过荧光显微镜，流式细胞仪或荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm处检测荧光强度（对于碘化丙锭，Ex / Em = 535/635 nm;对于Hoechst染料，Ex / Em = 350 / 461纳米）。
6.1对于流式细胞仪，使用FL1通道监测荧光强度（FL2通道用于碘化丙锭染色）。
6.2用于荧光显微镜和荧光酶标仪。将100μL细胞悬浮液置于96孔黑壁/微量滴定板透明底部的每个孔中。
注意：如果需要平衡细胞浓度，调整诱导细胞的悬浮体积以接近非诱导细胞群的细胞密度。如果您的细胞治疗不会导致受刺激细胞群数量的显着损失，则此调整步骤是可选的。
6.3使用FITC通道在荧光显微镜下观察细胞（用于碘化丙啶染色的TRITC通道，用于Hoechst染色的DAPI通道）。
6.4使用荧光酶标仪，使用Ex / Em = 490 / 525nm（在515nm处截止）底部读取模式监测荧光强度。
参考文献
Helicobacter pylori Secreted Protein HP1286 Triggers Apoptosis in Macrophages via TNF-Independent and ERK MAPK-Dependent Pathways
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: Frontiers in Cellular and Infection Microbiology (2017): 58
Death receptor 3 mediates necroptotic cell death
Authors: Sebastian Bittner, Gertrud Knoll, Martin Ehrenschwender
Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2016): 1–12
Helicobacter pylori protein JHP0290 exhibits proliferative and anti-apoptotic effects in gastric epithelial cells
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: PloS one (2015): e0124407
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货号 | 21259 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 10 mg | 价格 | 1008 | |
| Ex (nm) | 369 | Em (nm) | 503 | |
| 分子量 | 510.5 | 溶剂 | DMSO | |
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
产品基本信息
货号：21259
产品名称：氯离子荧光探针lucigenin
CAS：22103-92-0
规格：10mg
储存条件：-15℃避光防潮
保质期：12个月
产品物理化学光谱特性
分子量：510.5
溶剂：DMSO
激发波长（nm）：455
发射波长（nm）：505
产品介绍
氯离子荧光探针lucigenin是美国AAT Bioquest生产的用于检测氯离子的荧光探针。氯化物指示剂，其荧光依赖于氯离子浓度。 它的荧光通过碰撞淬灭被氯化物淬灭。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的氯离子荧光探针lucigenin。
点击查看光谱
参考文献
Flow injection chemiluminescence determination of isoniazid using the lucigenin-periodate system
Authors: Du J, Lu J.
Journal: Luminescence (2006): 26
Identification of cytochrome-b5 reductase as the enzyme responsible for NADH-dependent lucigenin chemiluminescence in human spermatozoa
Authors: Baker MA, Krutskikh A, Curry BJ, Hetherington L, Aitken RJ.
Journal: Biol Reprod (2005): 334
Chemiluminescence of lucigenin is dependent on experimental conditions
Authors: Hyrsl P, Lojek A, Ciz M, Kubala L.
Journal: Luminescence (2004): 61
Electrogenerated chemiluminescence reaction of lucigenin with isatin at a platinum electrode
Authors: Qi H, Zhang C.
Journal: Luminescence (2004): 21
Identification of cytochrome P450-reductase as the enzyme responsible for NADPH-dependent lucigenin and tetrazolium salt reduction in rat epididymal sperm preparations
Authors: Baker MA, Krutskikh A, Curry BJ, McLaughlin EA, Aitken RJ.
Journal: Biol Reprod (2004): 307
Lucigenin and coelenterazine as superoxide probes in mitochondrial and bacterial membranes
Authors: Kervinen M, Patsi J, Finel M, Hassinen IE.
Journal: Anal Biochem (2004): 45
Luminol-, isoluminol- and lucigenin-enhanced chemiluminescence of rat blood phagocytes stimulated with different activators
Authors: Pavelkova M, Kubala L.
Journal: Luminescence (2004): 37
[Chemiluminescent assay for biological substances–chemiluminescent assay for alkaline phosphatase using lucigenin and its application to enzyme immunoassay]
Authors: Maeda M.
Journal: Rinsho Byori (2004): 851
Chemiluminescence of lucigenin by electrogenerated superoxide ions in aqueous solutions
Authors: Okajima T, Ohsaka T.
Journal: Luminescence (2003): 49
Effect of the isocoumarin paepalantine on the luminol and lucigenin amplified chemiluminescence of rat neutrophils
Authors: Kitagawa RR, Raddi MS, Khalil NM, Vilegas W, da Fonseca LM.
Journal: Biol Pharm Bull (2003): 905