产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – Argonaute 蛋白
Tth argonaute 蛋白 (TtAgo) 收藏
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#M0665S
50 pmol
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特性
TtAgo 来自嗜热栖热菌，是一种可编辑的核酸内切酶，在 5’ 磷酸化的单链 DNA（ssDNA） 指导下能够切割底物靶序列，在底物与向导 DNA 互补序列的磷酸二酯键处产生断裂。
·所需 5’ 磷酸化 ssDNA 长度短，仅 16 -18 nt，成本低，可用 NEB T4 PNK 进行磷酸化
·向导/靶标序列的选择不受相邻序列限制
·对 ssDNA 和大多数双链 DNA（dsDNA）底物活性较高（在 dsDNA 底物上产生切刻），对 ssRNA 底物也有一定活性
·适用于体外应用
·参考 Tth Argonaute (TtAgo) 实验的优化指南
概述
TtAgo 是一种来自革兰氏阴性嗜热栖热菌（Thermus thermophiles）的原核 argonaute 蛋白，在 5′-磷酸化单链 DNA（16 – 18 nt）指导下，可发挥 DNA 介导的核酸内切酶作用。在二价 Mg2+（或Mn2+）金属离子存在时，该酶具有类 RNase H 活性（见产品使用说明 #1），并在与 DNA 向导链第 10 和 11 个碱基互补的碱基处切割底物。
TtAgo 工作示意图
TtAgo 在 65-85℃ 时具有活性（见产品使用说明 #2），对 ssDNA 活性最高，其次是 dsDNA，对单链 RNA（ssRNA）底物活性最低。该酶与单链向导 DNA 协同作用时，不会切割 dsDNA ，而只是切刻与向导 DNA 链互补的底物 DNA 链。该酶对双链 RNA（dsRNA）底物无活性。切割后的 5’ 和 3’ 末端产物可进行下游连接（1）。结果表明，在某些情况下，反应中加入热稳定单链 DNA 结合蛋白（ET-SSB，NEB #M2401）和/或热稳定解旋酶有助于切割 dsDNA 底物。
无向导 DNA 的 TtAgo 会通过 “剪切” 来降解 dsDNA，这被认为是 TtAgo 从入侵的或外源 DNA 中自发产生向导 DNA 的机制。（2）为防止这种非特异性活性的产生，向导 DNA 的摩尔量应超过 TtAgo 量的 5 倍。此外，向导链要与 TtAgo 一起在 ～75℃ 条件下孵育 10-30 分钟，形成核蛋白复合物后再加入底物进行反应。更多详细信息，请参阅操作步骤、说明书和使用说明。
TtAgo 适用于体外应用。
随酶提供的试剂
ThermoPol 反应缓冲液套装
浓度
1 µM
来源
TtAgo 纯化自携带革兰阴性嗜热栖热菌（Thermus thermophilus）克隆基因的大肠杆菌菌株，该克隆基因是 N 端含 6X His 标记的融合基因。
保存温度
-20°C
质保声明
TtAgo 蛋白经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。
参考文献
1. Hunt, E. A., Evans Jr, T. C., & Tanner, N. A. (2018). Single-stranded binding proteins and helicase enhance the activity of prokaryotic argonautes in vitro. PloS One. 13 (8), e0203073.
2. Swarts, D., Szczepaniak, M., Sheng, G., Chandradoss, S., Zhu, Y., & Timmers, E. et al. (2017). Autonomous Generation and Loading of DNA Guides by Bacterial Argonaute. Molecular Cell.. 65 (6), 985-99.