T7 RNA 聚合酶 收藏
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特性
合成 RNA 反义链,调控基因表达
概述
T3、T7 和 SP6 RNA 聚合酶分别对 T3、T7 和 SP6 噬菌体启动子具有高度的特异性。现已开发出多种载体,可将目的基因序列克隆到 T7 和 SP6 启动子下游的多克隆位点中,以克隆的 DNA 为模板体外合成相应的 RNA。用 T7 和 SP6 RNA 聚合酶合成的 RNA 具有 mRNA 的生物特性,可进行准确剪切。实验证实,用靶标 DNA 反向转录所产生的反义 RNA 能特异性阻断体内 mRNA 的翻译。由于RNA/DNA 杂交体比 RNA/RNA 和 DNA/DNA 杂交体更稳定,因此核酸杂交反应中的检测信号会更强。
来源
SP6 RNA 聚合酶来自重组 E.coli 菌株,该菌株携带克隆于 Salmonella typhimurium LT2Z 的 SP6 RNA 聚合酶基因。 T7 RNA 聚合酶来自重组 E.coli BL21 菌株,该菌株携带含可诱导的 lac UV5 启动子及其控制的 T7 基因 I 的 pAR1219 载体。T3 RNA 聚合酶来自重组 E.coli 菌株,该菌株携带可表达T3 基因载体。
反应条件
1X RNAPol 反应缓冲液 [40 mM Tris-HCl(pH 7.9),6 mM MgCl2, 2 mM 亚精胺,1 mM DTT]。反应时需加入各 0.5 mM 的 ATP、UTP、GTP、CTP(不随酶提供)和带有启动子的模板 DNA,在 37 ℃ 温育。
质保声明
无 RNA 聚合酶、DNase 和 RNase 污染。
单位定义
1 单位指在 37℃ 条件下, 1 小时内将 1 nmol 的 ATP 掺入酸不溶物所需要的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb-china.com 或 www.neb.com。
浓度
T3 RNA 聚合酶:50,000 units/ml;T7 RNA 聚合酶:50,000 units/ml;SP6 RNA 聚合酶:20,000 units/ml。
参考文献
有关该产品特性和应用的参考文献请登陆 www.neb-china.com,www.neb.com。